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技術(shù)文章

細胞的復蘇實驗

閱讀:355發(fā)布時間:2017-9-30

一. 實驗前準備:

1.將水浴鍋預熱至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二.取出凍存管:

1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。 
三.迅速解凍:

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
四.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min 
五.制備細胞懸液:

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數(shù):細胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養(yǎng)細胞:

將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞情況而定。

初學者易犯錯誤:

1.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。

2水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

3.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。

4.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。

 


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