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淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)技術(shù):形態(tài)學(xué)檢查法

閱讀:415發(fā)布時(shí)間:2017-9-14

    當(dāng)機(jī)體受到抗原的刺激時(shí),T淋巴細(xì)胞就可以轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)化在一定的程度上代表著機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。這種轉(zhuǎn)化也可在體外的T細(xì)胞的培養(yǎng)過程中加入適當(dāng)?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn),并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)作為檢查機(jī)體細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)。具體方法有形態(tài)學(xué)檢查法。

(一)操作方法 
1. 于培養(yǎng)瓶內(nèi)加0.2ml馬血,對(duì)照組與試驗(yàn)組各做2瓶,試驗(yàn)組均加PHA 30?g; 
2.37℃培養(yǎng)72h,每天輕搖1~2次; 
3.取出培養(yǎng)瓶,搖散血,倒入離心管,3 000r/min離心10min,去上清液; 
4.用血球泥制備推片,晾干; 
5.以瑞氏染液染2min~3min,加等量緩沖液,混勻繼續(xù)染3min,蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min,餾水沖洗,晾干; 
6.鏡檢,觀察,計(jì)數(shù)。 
(二)注意事項(xiàng) 
1.培養(yǎng)液zui適pH為7.2~7.4,過酸過堿都會(huì)影響細(xì)胞的生長而降低轉(zhuǎn)化率。培養(yǎng)液的類型與動(dòng)物的白細(xì)胞有關(guān),如小鼠的淋轉(zhuǎn)試驗(yàn),用RPMI-1640,用199液則不成功。 
2.培養(yǎng)時(shí)間 以72h~120h轉(zhuǎn)化率zui高,超過這個(gè)時(shí)間,則轉(zhuǎn)化率反而下降。 
3.吞噬細(xì)胞有時(shí)在形態(tài)上易與“過渡型"混淆。但巨噬細(xì)胞有其固有的特點(diǎn),核占細(xì)胞比較小且偏一邊,核染色質(zhì)濃集,細(xì)胞漿呈藍(lán)灰色或紅褐色,胞漿內(nèi)有大小不等的顆?;蛲淌晌?,且含有大小不等的氣泡。 
4.涂片要少蘸些細(xì)胞,推出尾部來,因淋巴細(xì)胞較大,易集中在尾部及邊緣。 
5.觀察淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,染色不要太濃,以便觀察核仁。 
6.嚴(yán)格的無菌操作,是淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。


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