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注意幾點(diǎn)即可防止胎牛血清培養(yǎng)中黑點(diǎn)的生成

閱讀:474發(fā)布時(shí)間:2017-6-26

    zui近有客戶(hù)咨詢(xún)胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)如何防止生成?對(duì)此我司經(jīng)過(guò)詳細(xì)分解,得出以下結(jié)論,為防止客戶(hù)由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對(duì)此一定要做好以下幾點(diǎn),方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利:

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。 

(2) 培養(yǎng)基無(wú)需 37℃水浴。

(3) 培養(yǎng)基保持 PH 值 7.0- 7.2。 

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。 

(5) 掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

1、化凍

    將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需要 30 分至 2 小時(shí)也可放于 4 度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入 4 度冰箱中暫時(shí)保存) 

2、滅活 

(1)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開(kāi)始加熱(同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶,內(nèi)裝 100ml 自來(lái)水,插入一根溫度 計(jì),溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn)) 

(2)當(dāng)溫度計(jì)顯示 56 度時(shí),停止加熱,改為間斷加熱,維持 56 度(±0.5 度)30 分鐘(±3 分鐘; 若不小心使溫度上升超過(guò) 56 度,則:若仍未超過(guò) 60 度,且時(shí)間很短,比如不超過(guò) 5 分鐘,則仍可使 用;若超過(guò) 60 度,或者時(shí)間較長(zhǎng),則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng))

3、分裝 

(1)轉(zhuǎn)入無(wú)菌間,在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入 10ml 離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻; 用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡, 則在酒精燈火焰上過(guò)一下)。 

(2)放入-20 度冰箱凍存 。

(3)全部操作約需要 4-6 小時(shí)。


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