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技術(shù)文章

脂肪干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

閱讀:1551發(fā)布時間:2017-6-1

脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)ADSCs細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低,同時它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞,適宜大規(guī)模培養(yǎng),對機體損傷小等優(yōu)點,而且其來源廣泛,體內(nèi)儲備量大,適宜自體移植,逐漸成為近年來新的研究熱點之一。

培養(yǎng)方法:

    將脂肪組織沖凈,稱重后消化。當(dāng)消化完成后,棄掉上層未消化的脂肪組織,將下層的細(xì)胞懸液以1500 r/min(375g),離心10 min 后棄上清,得到離心管底部的脂肪干細(xì)胞團,將其重懸,密度調(diào)整到1×105mL-1,然后接種在培養(yǎng)面積為25 cm2 的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。

    當(dāng)干細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶后按一傳二進行傳代,具體的傳代方法是:首先,用D-Hanks 沖洗一遍細(xì)胞,然后加入2 mL 的混合酶溶液(0.25%*和0.02%EDTA)消化,當(dāng)在顯微鏡下觀察到細(xì)胞發(fā)生明顯的變形,縮成球狀后,立即用含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基中止消化,并用吸管輕輕吹打瓶底部,確保細(xì)胞*脫落分離到懸液中,再把細(xì)胞懸液置于離心機上,以1000 r/min (167g),離心5 min。zui后,將離心得到的細(xì)胞團重懸,調(diào)整密度為合適密度進行接種。


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