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江蘇盛藍(lán)儀器制造有限公司
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酶標(biāo)儀的檢測(cè)原理

時(shí)間:2011/9/14閱讀:867
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光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱(chēng)為紫外光, 400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱(chēng)為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
  檢測(cè)單位:
  光通過(guò)被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,特定波長(zhǎng)下,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
  檢測(cè)單位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的縮寫(xiě),表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
  OD值由下述公式計(jì)算:
  E=OD=C×D×E
  C為檢測(cè)物的濃度
  D為檢測(cè)物的厚度
  E為摩爾因子
  在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),稱(chēng)為測(cè)量波
長(zhǎng)。
  但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下,檢測(cè)物光的吸收zui小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
  Anthos 酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
  儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào),zui大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0%,沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中,檢測(cè)物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計(jì)算如下:
  T=(Meas—Min)/(Max—Min)
  其中T為透光值, Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:
  MaX=3600 Mn=20 Meas=30
  T=(30-20)/3600-20)=0.0028
  OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
  Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
  儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí),儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量,選取zui中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
  光源的參照通道
  參照通道是用來(lái)校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
  酶標(biāo)儀的用途和其它提示
  用于ELISA試劑的測(cè)定,廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室,包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
  質(zhì)量控制
  質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
  空白校正
  有一些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來(lái)設(shè)置的,請(qǐng)按照試劑盒的  說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
  檢測(cè)結(jié)果的解釋
  由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測(cè)試劑的體積,都會(huì)造成OD值的不同,因此,  只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
 

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