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非洲爪蟾IGC抗體,IGC

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更新時(shí)間:2016-05-23 05:34:13瀏覽次數(shù):520次

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非洲爪蟾IGC抗體,IGC,
產(chǎn)品類型 一抗
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非洲爪蟾IGC抗體,IGC,Western的經(jīng)驗(yàn):
1.關(guān)于反復(fù)標(biāo)記和再標(biāo)記:一張膜上可以同時(shí)標(biāo)記很多抗體,但要注意,一般在兩個(gè)目的蛋白相差在5KD以上的,先后兩個(gè)抗體是不同的二抗.在兩個(gè)目的片段相差小于5KD時(shí),就需要經(jīng)過處理,再標(biāo)記了(Re-Blot),有些公司有再標(biāo)記的現(xiàn)成試劑,不過比較貴,zui簡(jiǎn)單的方法是:ddH2O洗5分鐘,0.2MNaOH5分鐘,再用ddH2O5分鐘*3次,然后可以再標(biāo)記了.要做多個(gè)抗體的膜\的選擇,用PVDF或教堅(jiān)固的,*用Amsham的Hybond-P,Hybond-Extra.本人zui多在一張膜上做個(gè)10個(gè)不同的抗體.
2.關(guān)于轉(zhuǎn)膜時(shí)的溫度:轉(zhuǎn)膜時(shí)的溫度比較重要,保持在10度以下,可以用冰?。≒harmacia的轉(zhuǎn)膜裝置),也可以在轉(zhuǎn)膜液中放入合適的事先準(zhǔn)備的冰袋(-70度>3小時(shí))(Bio-Rad),這樣既可以降溫又可以節(jié)約Buffer.
3.關(guān)于三名治:本人以前做時(shí)花很多時(shí)間在防止短路上,現(xiàn)在我做的時(shí)候根本沒有剪齊,zui主要的是趕氣泡,這是關(guān)鍵的關(guān)鍵,其實(shí)轉(zhuǎn)膜的原理是電流的單向流動(dòng),現(xiàn)在的好多公司的轉(zhuǎn)膜裝置的電極是一個(gè)平面,所以不用擔(dān)心短路的.(不信的可以試試!!)
4.關(guān)于轉(zhuǎn)膜電流和時(shí)間:一般轉(zhuǎn)膜的電流在200mA-400mA之間時(shí)間為1小時(shí),大片段的>50KD的可以選用350mA,小片段的可以用250mA,不過本人覺得上述電流均能很好的把大部分蛋白轉(zhuǎn)過去.
5.用脫脂奶粉封閉的效果不一定比用BSA差,不過我們?cè)囘^幾種奶粉,有一些奶粉不太適合.*使用的奶粉:雀巢高鈣奶粉,多力精低脂奶粉.一般國(guó)產(chǎn)的奶粉的顆粒比較大,不太容易溶解.
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由于篇幅有限,更多抗體說明書,價(jià)格等詳情,請(qǐng),我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)

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