牛主要組織相容性復(fù)合體(MHC/BoLA)ELISA試劑盒價(jià)格
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主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,生物試劑,免疫組學(xué),生物抗體,蛋白組學(xué),分子生物等。
ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右 (2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清 。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
生化試劑應(yīng)用常見問題:
1 試劑空白
1 線性范圍變窄 現(xiàn)象:高值測(cè)不高。原因:生產(chǎn)試劑時(shí)有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差。1.2 靈敏度變低現(xiàn)象:酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降,測(cè)定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差。原因:試劑底物濃度不足。1.3 低值偏高 現(xiàn)象:試劑空白的變化曲線(吸光度VS時(shí)間)明顯波動(dòng)。原因:試劑自身不穩(wěn)定,自行分解;工具酶純度不夠,雜酶含量超限,導(dǎo)致干擾作用。
2 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。因此,應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性,采用雙波長或多波長的檢測(cè)模式,并在結(jié)果計(jì)算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響,減少干擾程度。
3 測(cè)定范圍
每種待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍,樣品結(jié)果若超過此范圍,分析儀將顯示結(jié)果超過范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì),應(yīng)更換合格試劑。
4 底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法、兩點(diǎn)法測(cè)定酶活性時(shí),若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會(huì)超過某一吸光度變化范圍,監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線性,使測(cè)定結(jié)果不可靠。
5 酶的預(yù)活化
測(cè)定血清中的某些酶,如CK,離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半*。實(shí)驗(yàn)研究證明,NAC對(duì)血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測(cè)定為什么要延遲時(shí)間較長的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC*方法測(cè)定時(shí)需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強(qiáng)調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測(cè)定酶活性的結(jié)果要高些。了解更多詳細(xì)信息
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