牛瘦素（LEP）ELISA試劑盒

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主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒，生物試劑，免疫組學，生物抗體，蛋白組學，分子生物等。

ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求:

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）去除顆粒。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

生化試劑應用常見問題:

1 試劑空白

1 線性范圍變窄現(xiàn)象：高值測不高。原因：生產(chǎn)試劑時有效成分投料量不足；試劑成份穩(wěn)定性較差。1．2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應速度曲線斜率下降，測定結果有嚴重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。1．3 低值偏高現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線（吸光度VS時間）明顯波動。原因：試劑自身不穩(wěn)定，自行分解；工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導致干擾作用。

2 樣品信息

樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結果產(chǎn)生非化學反應的干擾。因此，應根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在結果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，減少干擾程度。

3 測定范圍

每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示結果超過范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質，應更換合格試劑。

4 底物耗盡

使用連續(xù)監(jiān)測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性非常高，底物接近被耗盡，吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。

5 酶的預活化

測定血清中的某些酶，如CK，離體（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基（一SH）被氧化造成的。只有通過適當?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半*。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。在AST，ALT采用IFCC*方法測定時需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調(diào)：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的結果要高些。了解更多詳細信息