LISA檢測以靈敏度較高、特異性較好等特點在食品安全檢測中得到廣泛的應用，但在操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大。如不注意，有可能導致顯色不*、花板、檢測無效等結(jié)果。所以實驗過程中應注意選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作。在ELISA操作過程中，同時做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，認真做好各項檢驗記錄，才能保證ELISA檢測質(zhì)量。
一、樣品的保存
    用于ELSIA檢測的樣本非常廣泛，包括各種動物組織、動物體液以及其他食品提取物等。有些樣本可以直接通過簡單離心、稀釋，有些則需要經(jīng)過理化方法進行提取。檢測樣品應保證新鮮，經(jīng)前處理的提取液應及時進行檢測，時間越長，提取液中的抗原的效價越低。如不及時檢測，應及時放4℃冰箱保存。防止細菌污染，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，可能會導致假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的HRP可能發(fā)生聚合，在間接法ELSIA檢測中可使本底加深。所以標本如需保存做多次檢測，宜采用少量分裝冰箱保存。組織樣本若不及時做處理，應該放置-15℃冰箱保存。

二、試劑的準備
    嚴格按照試劑盒的說明書的要求準備好需要用到的試劑。LEISA檢測中應采用蒸餾水或者去離子水，洗滌用水應新鮮和高質(zhì)量，注意查看是否需要和洗滌液進行稀釋。自配的緩沖液應用PH計測量校正。從冰箱取出的試劑必須與室溫平衡方可使用。試劑盒中本次試驗不需要的試劑部分及時放回冰箱保存。

三、加樣
    在ELSIA加樣步驟中，應加所加物加到ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般使用微量加樣器，按規(guī)定的量加入孔板中。每次加標本必須更換槍頭，以免交叉污染。加酶標記物和底物液時可用定量多道加樣器，使加樣過程迅速完成。
四、溫育
    溫育的方式一般采用水浴，可將酶標板置于水浴箱中，酶標板底貼著水面，是溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，酶標板上應加蓋，也可用塑料貼封或者保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。若保溫箱，酶標板應放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性能良好的材料或者如金屬等，在盒底墊濕的紗布，將酶標板放在紗布上。這樣能保證穩(wěn)定迅速平衡。無論水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫要嚴格限制在室溫的范圍內(nèi)，標準室溫溫度是指20℃-25℃，具體的操作時間根據(jù)說明書的要求嚴格控制溫育。
五、洗滌
    洗滌在ELISA過程中雖然不是一個反應步驟，但是卻決定著實驗的成敗，ELSIA反應就是靠洗滌來達到將游離和結(jié)合的酶標記物分離的目的。通過洗滌來清洗掉殘留在酶標板是未能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，已經(jīng)在反應過程中非常特異性地吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料材料對蛋白質(zhì)的吸附石普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELSIA操作過程中，洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù)，每一次清洗都必須謹慎進行，操作者應嚴格按照要求進行洗滌。清洗的方式有手工清洗和洗板機自動清洗兩種。下面主要介紹手工清洗方式。
      1、吸干或者甩干孔內(nèi)反應液
      2、用洗滌液洗一遍。（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）
      3、浸泡，將洗滌液注滿酶標孔，放置1-2min，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短。
      4、甩掉孔內(nèi)液體，用清潔毛巾或者吸水紙拍干。
      5、重復3和4步驟，洗滌4次。
六、顯色和比色
    顯色是ELSIA中的zui后一個溫育步驟，此時酶催化無色底物生產(chǎn)有色產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的zui重要的因素。加入底物后的反應時間和溫度應該按規(guī)定嚴格控制準確。
七、酶標儀讀板
    測讀吸光度值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰。有的酶標儀可用雙波長讀數(shù)，即每孔先后讀兩次，*次在波長，第二次在不敏感的波長，兩次測讀不移動酶標板的位置。zui終讀數(shù)得到值為兩者之差，即敏感波長值減去不敏感波長值。雙波長讀數(shù)可以減少由容器壁劃痕或指紋造成的光干擾。
八、結(jié)果判定
    根據(jù)實驗讀數(shù)，結(jié)果產(chǎn)品說明進行結(jié)果判定。