免疫組化

可以：（1）惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；（2）確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位；（3）對某類腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型；（4）發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術(shù)范圍的確定。
　　
　　實驗方法原理根據(jù)聚合酶技術(shù)把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結(jié)合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結(jié)合后，加入底物顯色。
　　
　　實驗材料石蠟切
　　
　　試劑、試劑盒PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強(qiáng)劑酶標(biāo)抗鼠兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯(lián)苯胺
　　
　　儀器、耗材烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭滴管
　　
　　實驗步驟一、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。
　　
　　二、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）
　　
　　三、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
　　
　　四、除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時。
　　
　　五、PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。
　　
　　六、除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。
　　
　　七、除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘。
　　
　　八、蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。
　　
　　其他一、特點
　　
　　1.在切片加上一抗后，第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信號有顯著的放大，其敏感性較SABC、SP法高。
　　
　　2.由于多聚物在體內(nèi)不存在，又不使用*，從而避免了由于*引起的非特異性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。
　　
　　3.辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的二抗、三抗，減少了實驗步驟，且試劑孵育時間短，只需15分鐘，使得免疫組化方法更簡單，實驗時間比SABC、SP法大為縮短。
　　
　　詳情請看：免疫組化