IgG飽和硫酸銨鹽析法

IgG（免疫球蛋白g）的分子量為150～160kDa，含量為血清的1．5％～1．8％，約占血清蛋白總量的17％，血清中免疫球蛋白總量的75％～
80％．19G是人類血清中zui重要的抗體，在體液免疫中起著“主力免疫”的作用[1IgG的純化方法根據(jù)IgG的不同特性，IgG的純化方法主要有以下方法：
飽和硫酸銨鹽析法
鹽析法是粗分離蛋白質(zhì)的重要方法之一．因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子吸附某種鹽離子后，其帶電表層使蛋白質(zhì)分子彼此排斥，而蛋白質(zhì)分子與水分子間的相互用卻加強(qiáng)，因而溶解度提高．但當(dāng)大量中性鹽加入，使水的活度降低，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，zui終引起蛋白質(zhì)分子間相互聚集并從溶液中析出．硫酸銨是鹽析zui常用的無機(jī)鹽，其主要特點(diǎn)是溶解度大，隨溫度變化小；對蛋白質(zhì)有保護(hù)作用，高濃度時可抑制微生物和蛋白酶的活性；溶解于水時不產(chǎn)生熱量，價(jià)格低廉，但在堿性環(huán)境中不能用硫酸銨作為沉淀劑進(jìn)行鹽析反應(yīng)．在血清中加入硫酸銨，當(dāng)飽和度為28％～33％時，優(yōu)球蛋白析出；33％～55％時，擬球蛋白析出；飽和度大于50％
后，白蛋白析出，這是硫酸銨分析沉淀血清蛋白的一般規(guī)律[目前用硫酸銨制備IgG的一般步驟如下：取血清lO mL，與等量的生理鹽水混合，逐滴加入中
性飽和硫酸銨，使其飽和度為50％，室溫放置1 h后，離心取沉淀．沉淀用20 mL生理鹽水溶解后，逐滴加人中性飽和硫酸銨，使其飽和度為33％，室溫放置1 h后，離心取沉淀，沉淀用5 mL生理鹽水溶解，即為IgG粗制品，然后將上述IgG粗制品，于0．01 mol／L pH7．4的磷酸鹽緩沖液的大燒杯中透析約24 h，換液3～4次，至透析液中無硫酸根離子為止．要獲得較高純度IgG，一般還需再用DEAE一纖維素柱層析純化．該法技術(shù)含量高有經(jīng)濟(jì)意義，
且制得的IgG也有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值C6]．

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