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ELISA試驗三項對照要求與用途
2013-8-17 閱讀(3561)
ELISA試驗三項對照要求與用途
ELISA檢測，按照試劑說明書要求，每次試驗、每塊扳上都要設(shè)置以下3項對照和用途：
1．空白對照：僅用稀釋液代替檢測樣本、用來觀察zui終反應(yīng)的顯色“本底”、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底”，也就是說：以本底為“零”讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值（A）；或者，在計算陰性對照均值（NCx）、陽性對照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早期的酶標(biāo)儀沒有自動扣除空白對照孔讀數(shù)的功能，這種酶標(biāo)儀現(xiàn)在已經(jīng)被淘汰了，寫上這段話的目的是補充說明設(shè)置空白對照的用途。空白孔具體如何讀取讀數(shù)，應(yīng)該按照說明書操作。
2．陰性對照：
（1）陰性對照的含義與要求：所謂陰性對照，是本次檢測試驗中采用與待檢測物（樣品、人用試劑就是人的血清等）具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并且能夠客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學(xué)試驗中有特異性抗原與抗體反應(yīng)）之間的差異。因此，用動物血清或其制品代替陰性人血清作為對照品，無論是從理論還是實踐上都是不可取的。注意：據(jù)我所知，國產(chǎn)ELISA試劑中，有的廠家是用動物血清制品稀釋配置或與部分人血清混合配置的；陰性對照讀數(shù)，并不是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平，這是假象！試想一下，真正采用“陰性人血清”的陰性對照品，NCx值會如此之低嗎？例如，雅培乙肝六項EIA試劑的NCx值，分別為：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個很簡單的方法，只要對比大量陰性樣本的實際讀數(shù)就“一目了然”啦！
（2）陰性對照分為兩類
一是受檢人血清中并不含有或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平，并且結(jié)果判斷值（Cut off）計算式中決定“是”（陽性）、或“否”（陰性）的*可變值。陰性對照值高，導(dǎo)致假陰性；反之，導(dǎo)致假陽性。二是陰性對照設(shè)置，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品，如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測抗—HBe、抗—HBc?；蛘撸x取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照，如檢測抗—HBc IgM。此類Cut off 值計算時，多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。
3．陽性對照（品）：
（1）陽性對照（品）的概念與要求：同陰性對照（品），只是采用“精選”的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選”，就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗進(jìn)行“篩試”、把含有“干擾性物質(zhì)”的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽性”干擾試驗結(jié)果。
（2）陽性對照（品）設(shè)置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：
一是陽性對照主要用于評價該項試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽性對照的測量值不列入Cut off值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽性對照的設(shè)置，不僅用于評價試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性，而且計入Cut off的計算。此時的Cut off值的含義是代表該標(biāo)志物在健康（正常）人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限（Cut off）時表示有診斷意義。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBc IgM等。
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