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上海哈靈生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: ELISA代測服務(wù),ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒,ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒

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人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒-新品推薦

2013-8-9  閱讀(702)

 

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 使用說明書

試劑盒組成:48T/96T

說明書:1份

封板膜:2片(48)/2片(96)

密封袋:1個(gè)

目的:【人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 ELISA試劑盒 說明書】本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中介素2(IL-2)的含量。

 

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 服務(wù)承諾:

供貨期:款到發(fā)貨。
工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 。詳情請
為客戶提供免費(fèi)代測服務(wù),我們將提供zui準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與zui真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

 

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 性能:

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

保存條件及有效期:

1.保存條件:2-8℃。

2.有效期:6個(gè)月

檢測范圍:

0.2IU/L - 6IU/L

試劑盒組成:

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:2700ng/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

實(shí)驗(yàn)原理:

   【人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 說明書】試劑盒選用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人組織蛋白酶K(Cath-K)捕獲抗體的包被微孔中,依次添加標(biāo)本、規(guī)范品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,通過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成結(jié)尾的黃色。色彩的深淺和樣品中的人組織蛋白酶K(Cath-K)呈正比。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,收集上清。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清液,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)洌瑢?biāo)本勻漿充分。離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔平別離加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl別離加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平別離加規(guī)范品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔別離加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度別離為1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。

2. 加樣:別離設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其他各步操作一樣)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui后稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗刷液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔參加酶標(biāo)試劑50μl,空白孔在外。

7. 溫育:同3。

8. 洗刷:同5。

9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動(dòng)混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

10. 停止:每孔加終止液50μl,停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 說明書】注意事項(xiàng):

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后才可以使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)將板條裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步驟加樣時(shí)都應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其度,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量較多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如果標(biāo)本中待測物質(zhì)含量太高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜乃限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不能混和使用。

10.如與英文說明書有異,請以英文說明書為準(zhǔn)。

 



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