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血液氧化應(yīng)激活性氧魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）
主要用途
血液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)自由基探針魯米諾和強(qiáng)化劑
的參與下，體液樣品中的活性氧族使發(fā)光物氧化降解并發(fā)光，在化學(xué)發(fā)光儀（Luminometer）的幫助下定量
檢測(cè)樣品中活性氧族（過(guò)氧化氫）的生成和數(shù)量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)
驗(yàn)證明的。適用于各種動(dòng)物和人體血液樣品包括血漿、血清等活性氧族的檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，
操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基
（hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧
自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）
次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等
細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，甚而導(dǎo)致諸如男性不育、冠心病、風(fēng)濕
性關(guān)節(jié)炎、退行變等各種病理狀況。魯米諾（luminol），又稱(chēng)氨基鄰苯二甲酰肼（luminol；
3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione），是一種脂溶性的發(fā)光劑，氧化后生成
魯米諾自由基而化學(xué)發(fā)光，具有460nm左右峰值的帶狀光譜，肉眼可觀察到鮮明的紫藍(lán)色。魯米諾以單價(jià)
氧化形式與超氧自由基陰離子反應(yīng)，產(chǎn)生不穩(wěn)定性?xún)?nèi)過(guò)氧化物或二氧環(huán)丁烷（Dioxetane），由此分解成電激
發(fā)狀態(tài)，通過(guò)釋放光子，回復(fù)到基態(tài)。魯米諾作為探針，可以檢測(cè)體液中過(guò)氧化氫、超氧自由基陰離子和
羥自由基，其中過(guò)氧化氫zui強(qiáng)，其發(fā)光強(qiáng)度與過(guò)氧化氫水平成正相關(guān)。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
強(qiáng)化液（Reagent B） 毫升
發(fā)光液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
保存強(qiáng)化液（Reagent B）和發(fā)光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在4℃冰箱
里；有效保證6 月
用戶(hù)自備
抗凝管：用于血液采集的容器
1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于去除樣品雜質(zhì)
測(cè)試管或黑色96 孔板：用于發(fā)光檢測(cè)用的容器
化學(xué)發(fā)光儀：用于檢測(cè)化學(xué)發(fā)光
實(shí)驗(yàn)步驟
一、樣品預(yù)處理
選擇一：血漿樣品
1． 準(zhǔn)備好抗凝管
2． 抽取1 毫升血液，置于抗凝管里
3． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上層黃色液體到新的1.5 毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
5． （選擇步驟）放進(jìn)－70℃冰箱里保存
6． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用（1 小時(shí)內(nèi)）
選擇二：血清樣品
1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管
2． 抽取1 毫升血液，置于儲(chǔ)存管里
3． 室溫下，靜置30 分鐘，直至血液凝結(jié)
4． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15 分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5 毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． （選擇步驟）放進(jìn)－70℃冰箱里保存
7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里備用（1 小時(shí)內(nèi)）
二、測(cè)讀
測(cè)讀開(kāi)始前，打開(kāi)化學(xué)發(fā)光儀，設(shè)定儀器內(nèi)溫度為37℃預(yù)熱和整合測(cè)讀10 秒或15 分鐘；然后關(guān)掉實(shí)驗(yàn)室
的燈光。將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化，嚴(yán)格置于暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 準(zhǔn)備好測(cè)試管，做好標(biāo)記：陰性對(duì)照、樣品本底和樣品活性
2． 移取xx 微升清理液（Reagent A）到陰性對(duì)照測(cè)試管
3． 移取400 微升上述預(yù)處理的待測(cè)血液到樣品本底測(cè)試管
4． 移取400 微升上述預(yù)處理的待測(cè)血液到樣品活性測(cè)試管
5． 分別加入xx 微升強(qiáng)化液（Reagent B）到上述測(cè)試管，除樣品本底測(cè)試管外
6． 分別加入xx 微升發(fā)光液（Reagent C）到上述測(cè)試管，除樣品本底測(cè)試管外
7． 輕輕渦旋混勻
8． 即刻放進(jìn)37℃化學(xué)發(fā)光儀里測(cè)讀
9． 整合測(cè)讀10 秒，獲得相對(duì)發(fā)光單位（relative light unit；RLU）
10．或者整合測(cè)讀15 分鐘，獲得光電子讀數(shù)：X 106 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液
體閃爍儀替代）
11．計(jì)算ROS 水平：
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為50 次操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 測(cè)試前，血液須新鮮收集，1 小時(shí)內(nèi)為
4． 樣品制備后即刻測(cè)讀，不宜過(guò)夜保存
5． 必要時(shí)，例如活性氧族過(guò)低，可以濃縮樣品處理
6． 如果測(cè)定體系變化，則試劑用量相應(yīng)變化
7． 系統(tǒng)操作過(guò)程中，陰性對(duì)照只需測(cè)定一次
8． 測(cè)讀的所有步驟均須在暗室里進(jìn)行
9． 如果是注射式化學(xué)發(fā)光儀，建議測(cè)試前后使用無(wú)離子水沖洗化學(xué)發(fā)光儀注射（injector）管道
10．本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感