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10008 v.A

細(xì)胞活力藍色熒光（DAPI）檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細(xì)胞活力藍色熒光檢測試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測信號來測定活體細(xì)胞和死亡細(xì)胞之比例的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。適用于各種生長中的動物或人體細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，著色清晰。
技術(shù)背景
作為細(xì)胞DNA染色劑之一的4，6－二咪基－4-聯(lián)苯基吲哚（ 4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發(fā)波長356nm，使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測信號。
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液（Reagent A） 毫升
固定液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 微升
裂解液（Reagent D） 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（）：用于細(xì)胞脫離
*細(xì)胞培養(yǎng)液（）：用于混勻細(xì)胞的培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞操作的容器
臺式離心機：用于細(xì)胞沉淀收集
1.5毫升離心管：用于細(xì)胞檢測操作的容器
熒光顯微鏡：用于觀察染色并具熒光的細(xì)胞
血細(xì)胞計數(shù)器：用于細(xì)胞計數(shù)
實驗步驟
1． 開啟熒光顯微鏡
2． 移取25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液到新的15毫升錐形離心管（收集所有漂浮細(xì)胞）
3． 加入xx毫升緩沖液（Reagent A）到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，清洗生長中的細(xì)胞表面
4． 抽去xx毫升清洗液到15毫升錐形離心管
5． 加入xx毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)平面
6． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種
7． 輕輕震動培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入15毫升錐形離心管
9． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
10．小心抽去上清液
11．加入xx毫升緩沖液（Reagent A），充分混勻（注意：參見注意事項5）
12．移出xx微升細(xì)胞樣品到1.5毫升離心管
13．加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升離心管
14．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
15．加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
16．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
17．移出xx微升離心管中的混勻物到血細(xì)胞計數(shù)器的前池
18．加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升離心管
19．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
20．移出10微升離心管中的混勻物到血細(xì)胞計數(shù)器的后池
21．在（倒置）熒光顯微鏡（10倍）紫外波長下，觀察并計數(shù)（注意：參見注意事項6）
22．血細(xì)胞計數(shù)器前池樣品顯示熒光細(xì)胞核的為死亡細(xì)胞，而血細(xì)胞計數(shù)器后池樣品顯示熒光細(xì)胞核的為細(xì)胞總數(shù)
23．確定活體細(xì)胞和死亡細(xì)胞的比例
注意事項
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞，直接從實驗步驟8開始
3． DAPI為半通透性染料，不能染色活細(xì)胞
4． 本產(chǎn)品的裂解液（Reagent D）能夠充分溶解紅細(xì)胞，因此可用于計量血液中有核細(xì)胞
5． 建議待測細(xì)胞樣品為每毫升1 X 106細(xì)胞濃度左右
6． 細(xì)胞計數(shù)時乘上稀釋倍數(shù)104。標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計數(shù)器（Hemocytometer）的計算方法是：
1毫米方塊的細(xì)胞計數(shù)X 104（稀釋倍數(shù)）＝實際細(xì)胞數(shù)/毫升
7． 本產(chǎn)品可直接染色生長中的貼壁細(xì)胞，染色液和培養(yǎng)液比例為1：100
8． 本公司提供系列細(xì)胞繁殖和活力檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰