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上海哈靈生物科技有限公司
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祝賀使用本公司產(chǎn)品雙抗體酶聯(lián)免疫試劑盒試驗(yàn)成功并發(fā)布論文
2016-11-15 閱讀(576)
名稱(chēng)：雙抗體酶聯(lián)免疫試劑盒
規(guī)格：96T/48T
介紹：
酶聯(lián)免疫試劑盒ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒） (以下簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）) ：是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用zui廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 ) 表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理促卵泡素（FSH）是動(dòng)物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過(guò)細(xì)胞膜,FSH必須與靶細(xì)胞膜上的促卵泡素受體（FSHR）結(jié)合,經(jīng)過(guò)受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細(xì)胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過(guò)PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。酶聯(lián)免疫試劑盒工作環(huán)境1． 37℃恒溫箱。2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。3． 自動(dòng)洗板機(jī)。4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。5． 蒸餾水，容量瓶等6． 干凈的試管和Eppendof管酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟1． 確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。4． 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過(guò)程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有 明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時(shí)，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過(guò)30分鐘）。10． 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶(hù)也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
