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上海哈靈生物科技有限公司
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ELISA試劑盒樣本中糖原的測(cè)定
2016-1-13 閱讀(605)
實(shí)驗(yàn)原理
正常肝糖原的含量約占肝重的5%。許多因素可影響肝糖原的含量，入飲食、饑餓、糖皮質(zhì)激素及腎上腺素等。
糖原在濃酸中可水解為葡萄糖，濃硫酸能使后者進(jìn)一步脫水生成糖醛衍生物—5-羥甲基呋喃甲醛。此化合物再和蒽酮作用生成藍(lán)色化合物，與用同法處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液比色，即可推算出糖原含量。糖原在濃堿溶液中非常穩(wěn)定，故在顯色之前肝組織先放在濃堿中加熱，破壞其他成分，而保留肝糖原。
實(shí)驗(yàn)方法
1.肝糖原的提?。喝◇w重在25g以上的健康小白鼠1只，斷頭處死，剖腹取出肝臟，用生理鹽水沖洗后，再用濾紙吸干水分，準(zhǔn)確稱取肝組織0.5g，放入盛有30% KOH溶液1.5ml的試管中，置沸水浴煮20分鐘（肝組織必須全部溶解，否則影響比色），取出后冷卻，將試管內(nèi)容物全部移入100ml的容量瓶（用蒸餾水多次洗滌試管，一并收入容量瓶?jī)?nèi)），加蒸餾水至刻度，仔細(xì)混勻。
2.糖原的測(cè)定：取干凈試管3支，編號(hào)后按表1-6加樣，混勻后，置于廢水浴中10分鐘，冷卻后選用620nm的單光色，用空白管調(diào)零，測(cè)定2.3管的吸光度。
表1-6
3.計(jì)算：
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注意事項(xiàng)
1.此法測(cè)定值在肝糖原含量為1.5-9%之間。若肝糖原小于1%時(shí)，由于蛋白質(zhì)的干擾測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確，須改用間接法測(cè)定，即在肝組織消化后用95%乙醇沉淀肝糖原（1:1.25），離心分離，用蒸餾水2ml溶解肝糖原，再按1-6表操作。
2.公式中的1.11為此法測(cè)得葡萄糖含量換算成糖原含量的常數(shù)，即100μg葡萄糖用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于111μg糖原用蒽酮試劑所顯之色。
