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培養(yǎng)基的制備進程
2015-7-20 閱讀(634)
意圖請求
1．把握通常培育基制備的準則和請求。
2．了解通常培育基制備的進程。
操作過程
培育基的制備準則和請求
培育基是依據(jù)各類微生物成長繁衍的需求，用人工辦法把多種物質(zhì)混合而成的養(yǎng)分物。通常用來別離、培育菌類。常用的培育基有基礎(chǔ)培育基、增菌培育基、挑選培育基、鑒別培育基和厭氧培育基。在制備培育基時，應(yīng)把握如下準則和請求：
培育基有必要富含細菌成長繁衍所需求的養(yǎng)分物質(zhì)。所用的化學藥品有必要純潔，稱取的份量必須。培育基的酸堿度應(yīng)契合細菌成長請求。按各種培育基請求測定調(diào)理pH值。多數(shù)細菌成長的適合pH值為7.2～7.6，呈弱堿性。
培育基的滅菌時刻和溫度，應(yīng)按照各種培育基的規(guī)定進行，以確保滅菌作用及不丟失培育基的必需養(yǎng)分成分。培育基經(jīng)滅菌后，有必要置37℃溫箱中培育24小時，無菌成長者方可應(yīng)用。所用器皿須潔凈忌用鐵或鋼質(zhì)器皿，請求沒有按捺細菌成長的物質(zhì)存在。 制成的培育基應(yīng)該是通明的，以便調(diào)查細菌成長性狀以及別的代謝活動所發(fā)生的改變。
培育基制備進程
不一樣的培育基其制備辦法也不一樣，通常包含以下過程：
（一）稱量試劑 依據(jù)不一樣的菌類和用處，挑選適合的培育基，培育基所需試劑有必要純潔。
（二）校對pH值 將稱量好的培育基各種成分放入容器內(nèi)，符號劃線，加熱溶解，彌補水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精細試紙或酸度計測定。用1N
NaOH和1N HCl調(diào)理pH值到適合范圍內(nèi)。
（三）過濾 將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培育基倒入其間過濾至通明。
（四）分裝 將過濾后的培育基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，預(yù)備滅菌。
（五）滅菌
培育基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。通常微生物的養(yǎng)分細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能到達*滅菌的意圖。依據(jù)蒸汽溫度隨壓力增加而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因而，在同一溫度條件下，選用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法作用要好。并且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝結(jié)變性，由于蒸汽的穿透力強，滅菌作用好。 高壓蒸汽滅菌，通常選用15磅／平方（即1.05kg／cm2）壓力，此刻的溫度是121.3℃。滅菌20～30分鐘后，可到達*滅菌的意圖。在進行滅菌的時候，首要要把滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排出，否則，冷空氣存在會下降鍋內(nèi)的實踐溫度，影響滅菌作用。
三、基礎(chǔ)培育基的制備
（一）牛肉浸液（肉水）
1．成分 新鮮牛肉 500g ，水1000 ml。
2．制法
（1）取新鮮牛肉，除掉肌膜、脂肪，切成小塊，用絞肉機絞碎。
（2）按上述比例加水，浸泡24小時（夏天應(yīng)將浸泡液放置在低溫的當?shù)兀乐垢瘮。患偃鐩]有冷藏條件時，可省去浸泡24小時這一步），其間應(yīng)拌和數(shù)次。
（3）次日取上液煮沸一小時，并不斷拌和。
（4）補足蒸騰的水分，用白布或絨布過濾后分裝于三角瓶中，預(yù)備滅菌。
（5）置高壓滅菌器內(nèi)，15磅滅菌20～30分鐘，置低溫、暗處保留備用。
3.用處
用于制備各種培育基的基礎(chǔ)液。
（二）肉浸液肉湯（通常肉湯）
1．成分 肉水 1000 ml ，蛋白胨 10g，氯化鈉 5g，磷酸氫二鉀 2g。
2．制法
（1）將以上成份加溫溶于牛肉浸液中。
（2）調(diào)pH值為7.4～7.6。
（3）濾紙過濾后分裝。
（4）15磅20～30分鐘滅菌后備用。
3．用處 作通常細菌培育用。
（三）養(yǎng)分瓊脂培育基（通常瓊脂）
1．成分 肉水 1000ml，蛋白胨10g，磷酸氫二鉀 lg ，氯化鈉 5g，瓊脂 20g。
2．制法
（1）將上述成分混合后，加熱溶解，補足水份。
（2）校對pH值7.4～7.6。
（3）用紗布夾棉花過濾。
（4）分裝于中試管或三角瓶中。
（5）高壓滅菌20～30分鐘后，將中試管擺成斜面，保留備用。
3．用處 通常細菌別離培育、菌種保留或用作特別培育基。
（四）半固體培育基 基本上與養(yǎng)分瓊脂的制備相同，僅將瓊脂量削減至0.5～0.7％（1000 ml中加5～7g瓊脂）即可。
（五）鮮血瓊脂
將滅菌的養(yǎng)分瓊脂加熱溶化，冷卻至45～50℃時，參加5～8％無菌脫纖鮮血（綿羊、黃牛、馬和兔等），分裝于試管后當即擺成斜面、或傾注于平皿中，待凝結(jié)后，置37℃培育1～2日。有污染者拋棄；無菌者保留，置冰箱備用。
無菌脫纖維鮮血的制備：以無菌操作采取動物鮮血（綿羊、黃牛、馬從頸靜脈采血；兔則從心臟采血），放入帶玻璃珠的無菌三角瓶內(nèi)，搖擺5～10分鐘，放冰箱中備用。
