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血清是細(xì)胞培養(yǎng)中Z重要的元素之一
2015-6-29 閱讀(600)
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。因此，我特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題，供大家參考：
1. 保存血清的方法?我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2. 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?GIBICO的胎牛血清 沒有預(yù)老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: ? 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。? 解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。? 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。? 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。? 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差別?Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清執(zhí)行的所有的標(biāo)準(zhǔn)檢驗程序，,除了這些標(biāo)準(zhǔn)檢測，Certified胎牛血清還有一些附加的檢測：zui終內(nèi)毒素含量的檢測噬菌體檢驗生物化學(xué)檢測激素的檢測血紅蛋白檢測Sf9 細(xì)胞生長促進(jìn)及方法學(xué)檢測
9. 如何評估ES細(xì)胞合格的胎牛血清?使用D3 ES細(xì)胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進(jìn)、生長抑制和分化因子非常敏感的細(xì)胞系。相關(guān)生長效率分析：當(dāng)ES細(xì)胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測啟動和支持ES細(xì)胞克隆的能力。細(xì)胞毒分析：當(dāng)以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測ES細(xì)胞和feeder細(xì)胞的生長能力。相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析：檢測胎牛血清支持未分化ES細(xì)胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細(xì)胞小顏色深紅粉紅，分化的細(xì)胞較大，豐滿，顏色較淺。所有的分析在沒有ESGRO的情況下進(jìn)行，培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導(dǎo)致的問題。（ESGRO或LIF經(jīng)常用來保持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)。）培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)大約8批血清中有1批可以用來培養(yǎng)ES細(xì)胞。
