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上海哈靈生物科技有限公司
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ELISA試劑盒中牛乳中鏈霉素的作用
2013-11-28 閱讀(715)
ELISA試劑盒初步組裝和穩(wěn)定的每盒點(diǎn)檢查和優(yōu)化，成功建立了一個(gè)穩(wěn)定的6個(gè)月ELISA試劑盒，并以所組建的試劑盒對(duì)牛奶樣品中的添加藥物進(jìn)行了測(cè)定。利用5C10雜交瘤細(xì)胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測(cè)SM殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。
氨基糖苷類抗生素是一類應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物
采用包被抗原稀釋度1∶3200，腹水抗體的工作濃度1∶1.6×105，尺度曲線線性方程為y=1.0522-0.3276x（10～1000ng/ml），半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml，檢測(cè)限約為5ng/ml。包括鏈霉素（SM），慶大霉素（GM），卡那霉素（KM）等，對(duì)奶牛，子宮內(nèi)膜炎奶牛乳腺炎效果很好，通常用于獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。
患有乳腺炎的奶牛鏈霉素肌肉注射和乳腺癌藥物治療，用本試劑盒牛奶中鏈霉素殘留濃度測(cè)定試劑盒，放棄了給藥后至少2D和4.5天證明牛奶。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了鏈霉素的5種人工抗原，從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進(jìn)行比較，*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原，通過雜交瘤技術(shù)獲得1株能不亂分泌抗鏈霉素特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株5C10。
通過實(shí)驗(yàn)比較了5種樣品處理方法，選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測(cè)定。
探索一種能夠檢測(cè)牛奶中鏈霉素殘留量的快速和有效的方法，本研究采用單克隆抗體技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)，合成人工抗原，制備出抗鏈霉素單克隆抗體，建立了檢測(cè)牛奶中SM殘留的ELISA測(cè)定法，組建成鏈霉素快速檢測(cè)ELISA試劑盒并進(jìn)行了優(yōu)化和實(shí)際應(yīng)用。
作為一種靈活，快速，特異的方法，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法已逐漸被應(yīng)用于藥物殘留，在國(guó)內(nèi)外建立了理化檢測(cè)鏈霉素基地左乳，固然有些方法比較敏捷、，但因?yàn)榉椒◤?fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、花費(fèi)大、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。制備的腹水效價(jià)為1∶1280000，蛋白濃度為26.2mg/ml，與其他抗菌藥物的交叉反應(yīng)率均低于0.1%。
ELISA試劑盒尺度曲線的批內(nèi)變異系數(shù)為11.87%，均勻批間變異系數(shù)為8.017%。建立ELISA尺度曲線的線性方程為y=1.8061-0.4932x（線性范圍25～2500ng/ml），其LOD為8.11ng/ml，低于劃定的牛奶中鏈霉素zui低殘留*200ng/ml。然而，行政違法引起動(dòng)物產(chǎn)品特別是哺乳期的牛奶中的獸藥殘留，對(duì)人體健康的潛在危害。
