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顯微鏡常用的7種觀察方式

時間:2014/2/26閱讀:3011
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    1、明視野觀察
    是通用的一種光學(xué)顯微鏡。利用光線照明,標(biāo)本中各點(diǎn)依其光吸收的不同在明亮的背景中成像。它由物鏡、目鏡、聚光鏡、光源、載物臺和支架等部件組成。其中聚光鏡用于調(diào)節(jié)顯微鏡的照明,物鏡和目鏡是放大微小物體成像的主要部件。在明視野顯微鏡中,有代表性的就是生物顯微鏡,使用染料對生物標(biāo)本染色后增加了反差,成為明視野顯微鏡的主要觀察對象
    2、暗視野觀察
    暗視野實(shí)際是暗場照明發(fā)。它的特點(diǎn)和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,視場成為黑暗的背景,而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,微塵在強(qiáng)光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。
    暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過被檢物體,而是將光線改變途徑,使其斜射向被檢物體,使照明光線不直接進(jìn)入物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象。暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察,高達(dá)0.02—0.004
    3、相差鏡檢法
    在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中,相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對于無色通明的生物標(biāo)本,當(dāng)光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標(biāo)本。
    相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察,因此相差鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
    相差顯微鏡的基本原理是,把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。
    4、微分干涉觀察法
    微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,它不僅能觀察無色透明的物體,而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn),觀察效果更為逼真。微分干涉稱鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強(qiáng)度相等,光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過被檢物體,在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小,而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺。 微分干顯微鏡的物理原理*不同于相差顯微鏡,技術(shù)設(shè)計要復(fù)雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學(xué)組件:偏振器)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器。偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面,使光線發(fā)生線性偏振
    5、偏光觀察法
    偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。偏光顯微鏡的特點(diǎn),就是將普通改變?yōu)槠膺M(jìn)行鏡檢的方法,以鑒別某一物質(zhì)是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物,化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。
    6、相襯觀察法
    斜射光照射到標(biāo)本產(chǎn)生折射、衍射,光線通過物鏡光密度梯度調(diào)節(jié)器產(chǎn)生不同陰影,從而使透明標(biāo)本表面產(chǎn)生明暗差異,增加觀察對比度。不但可以提高未染色標(biāo)本的可見性和對比度,還能圖象顯示陰影或近似三維結(jié)構(gòu)而不會產(chǎn)生光暈,可檢測雙折射物質(zhì)(巖石切片、水晶、骨頭) ,玻璃,塑料等培養(yǎng)皿中的細(xì)胞,器官和組織
    7、熒光觀察法
    以紫外線為光源, 用以照射被檢物體, 使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一

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