在上世紀(jì)30年代，免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，簡稱IHC）的原理就已經(jīng)為人所知，但直到1942年，*個(gè)IHC研究成果才正式發(fā)表。這也被譽(yù)為免疫熒光技術(shù)的里程碑。哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Albert Coons在《免疫學(xué)雜志》上發(fā)表文章，利用FITC標(biāo)記的抗體來鑒定感染組織中的肺炎球菌抗原。1自那以后，組織固定方法、檢測標(biāo)記和顯微鏡都在不斷改進(jìn)，讓免疫組化成為診斷和研究中的一個(gè)*工具。
在病理科，利用特異的腫瘤標(biāo)志物，醫(yī)生通過IHC診斷腫瘤是良性還是惡性，確定腫瘤的分期和分級，并確定細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)移的來源，以便找到原發(fā)腫瘤的位置。同樣，IHC也能用于藥物開發(fā)，通過檢測疾病靶點(diǎn)的上調(diào)或下調(diào)來判斷藥物療效。
免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來檢測組織切片中的抗原（如蛋白）。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體，而histo意味著組織。另一種類似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry，簡稱ICC）。這兩個(gè)詞大家經(jīng)常混著用，看著好像差不多，但實(shí)際上還是有點(diǎn)區(qū)別。這里順便說說。
IHC vs. ICC
對于IHC，組織是來自患者或動(dòng)物，經(jīng)過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片，封片后再處理。通過這種方法，研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位，同時(shí)維持周圍組織的原先結(jié)構(gòu)。
對于ICC，大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除，只剩下整個(gè)細(xì)胞來染色。ICC的來源可以是細(xì)胞懸液，來自患者或動(dòng)物（如血涂片、拭子等），或在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系。
除了生物學(xué)來源，IHC和ICC在樣品處理的程度上也有所不同。ICC需要透化，要么通過固定過程，要么是單獨(dú)的透化步驟，這樣抗體才能與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)相結(jié)合。而IHC可能不要單獨(dú)的透化步驟，這取決于切片的厚度和固定方法。包埋在石蠟中的IHC切片必須進(jìn)一步處理，才能進(jìn)行抗體染色。一旦處理好樣品，IHC和ICC的染色操作就幾乎沒什么差異了。當(dāng)然，就染色而言，根據(jù)所使用的抗體來優(yōu)化還是少不了的。
設(shè)計(jì)一個(gè)成功的IHC/ICC實(shí)驗(yàn)
從技術(shù)上講，IHC的原理很簡單。首先固定樣品，以保留細(xì)胞完整性，之后與封閉液共同孵育，避免抗體的非特異結(jié)合。隨后將樣品先后與一抗和二抗孵育，并通過顯微鏡分析觀察信號。
然而，這并不意味著實(shí)驗(yàn)很好做。zui大的挑戰(zhàn)在于如何確定*的實(shí)驗(yàn)條件，讓每個(gè)抗原都產(chǎn)生強(qiáng)烈而特異的信號。如果是個(gè)高豐度蛋白，那么挺好辦，需要的固定時(shí)間短，封閉時(shí)間短，可以用熒光標(biāo)記一抗直接檢測。但如果要檢測冰凍切片中的磷酸化蛋白呢？那可能需要抗原修復(fù)，外加放大檢測。
R&D Systems的列出了IHC/ICC實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和優(yōu)化的變量，如下表。
看完這些，是不是覺得有些頭暈?zāi)兀@么多地方需要優(yōu)化。其實(shí)也沒那么恐怖，生物通接下來會(huì)發(fā)布一些優(yōu)化指南，包括如何制備樣品，如何選擇固定劑，如何優(yōu)化抗體檢測等，千萬別錯(cuò)過。此外，R&D Systems等也公布了免疫組化的基本操作，以及檢測特定抗原的具體條件，可供您參考。
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