微量丙二醛（MDA）測試盒
（比色法）
本試劑盒是在原MDA 試劑盒針對一些含量較少的樣本
（比如培養(yǎng)細胞及細胞上清）測試效果不是太好的的基礎(chǔ)上
改進的一種更為靈敏、簡便的測試方法。
一、測試原理：
過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 （MDA）可與硫代巴
比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物,在 532nm 處有吸
收峰。因底物為硫代巴-比妥酸（Thibabituric Acid TBA）所
以此法稱 TBA 法。
二、測試所需儀器和試劑：
可見光分光光度計，可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或
沸水浴鍋，離心機,無水乙醇(分析純),冰醋酸(分析純)。
三、試劑盒組成與配制(50 管/24 樣 A003-2-1)：
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 6mL×1 瓶，用時加 170mL 雙蒸水混勻，4℃
冷藏。（注意不要碰到皮膚上）。
試劑三：粉劑×1 支，用時將粉劑加到 32mL 雙蒸水中，加
熱到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸 30mL，
混勻后冷卻至室溫，配好的試劑避光室溫保存。
（注：冰醋酸自備）
標準品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。
四、試劑盒組成與配制（100 管/48 樣 A003-2-2）：
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 12mL×1 瓶，用時每瓶加 340mL 雙蒸水混
勻,4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。
試劑三：粉劑×1 支，用時將粉劑加到 62mL 雙蒸水中，加
熱到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸
60mL，混勻后冷卻至室溫，配好的試劑避光室溫
保存。（注：冰醋酸自備）
標準品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。
水浴（或用鍋開蓋煮沸）40 分鐘，取出后流水冷卻， 532nm
處，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值 A。
a* 表示所取的樣品量、標準品量、無水乙醇的量、試劑一的量，
四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標準品、無水乙醇、試劑
一也取 0.1mL，若樣品取 0.2mL 則標準品、無水乙醇及試劑
一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線，因而結(jié)果不
受影響。
** 對照管每個樣本都需要做。
2、參考取樣量：血清（漿）取 0.1～0.2mL。低密度脂蛋白懸
液取 0.1～0.2mL 。細胞懸液及細胞上清取
0.1～0.2mL。
3、規(guī)范操作方法標準管參考吸光度：當標準品取樣量為 0.1mL
時，則標準管吸光度減去空白管的吸光度為
0.065～0.070（1cm 光徑）。當標準品取樣量為
0.2mL 時，則標準管吸光度減去空白管的吸光
度為 0.130～0.140（1cm 光徑）。
4、規(guī)范操作方法及簡便操作方法中，若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度
太低，可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘，但您的同
一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘，以免造成批
間差異。
六、簡便操作方法：（如果樣本數(shù)量很多，您可以采用簡便操作
方法。）
1、混合試劑的配制：
工作液Ⅰ的配制:試劑一:試劑二:試劑三= a*:3:1,用多少配
多少,配好后當天測定；
工作液Ⅱ的配制:試劑一:試劑二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多
少配多少,配好后當天測定。
注:a*表示與樣本的取樣量相同,單位為毫升(mL)
旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小
孔，95℃水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸）40 分鐘，取出后流水冷卻，
532nm 處，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值。
a* 表示所取的樣品量、標準品量、無水乙醇的量、試劑一
的量，四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標準品、無水
乙醇、試劑一也取 0.1mL，若樣品取 0.2mL 則標準品、
無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正
比曲線，因而結(jié)果不受影響。
** 對照管每個樣本都需要做。
注 1：以上規(guī)范操作法及簡便操作法適用于人及各種動植物
的樣本（包括血清、動植物組織及體液、細胞及細胞
培養(yǎng)液等）。
注 2：規(guī)范操作方法及簡便操作方法中，若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸
光度太低，可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘，
但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分
鐘，以免造成批間差異。
七、測定意義：
機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊
生物膜中的多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，
PUFA），引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。
如：醛基（丙二醛 MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或
內(nèi)過氧基，以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活
性氧轉(zhuǎn)化成活性化學劑，即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物，而
且通過鏈式或鏈式支鏈反應，放大活性氧的作用。因此，初
始的一個活性氧能導致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解
產(chǎn)物中，一些是無害的，另一些則能引起細胞代謝及功能障
礙，甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸
（PUFA）的過氧化引起細胞損傷，而且還能通過脂氫過氧
化物的分解產(chǎn)物引起細胞損傷。因而測試 MDA 的量常?？?/span>
反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程
度。
MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合，SOD 活力的
高低間接反應了機體清除氧自由基的能力，而 MDA 的高低
又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度，通過 SOD
與 MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學、生物學、藥理及工農(nóng)業(yè)生
產(chǎn)的發(fā)展。
八、注意點：
1、試管要干凈，尤其測微量樣品時更為重要。
2、配制試劑時要充分混勻。測試過程中管吸的試劑要
丟棄，加樣品或試劑時要垂直加，不要加在管壁上。95℃
水浴前要充分混勻。
3、水浴時間及溫度要固定。沒有水浴鍋的單位可用鋁鍋、
鋁盒、鋁盆等開蓋煮沸即可。
4、高脂樣本操作時，離心沉淀一定要充分，否則影響吸光
度，造成結(jié)果不穩(wěn)定。這種情況可增加離心轉(zhuǎn)速（3000
轉(zhuǎn)/分以上）或者延長離心時間使沉淀。
5、冬天若發(fā)現(xiàn)測試溶液呈霧狀可以輕輕放水浴箱稍稍加
溫，待溶液溶解呈透明狀態(tài)用移液器吸取放入比色杯
中，若仍然呈霧狀，則考慮為高脂血癥。
6、樣本取樣量：若您的樣量較多，取樣量可以加倍，抽提
過程中，雙蒸水、無水乙醇、氯仿均要加倍。若您的樣
本為貧血病人的血樣，則取樣量也要加倍，抽提過程中，
雙蒸水、無水乙醇、氯仿的量則不變。
7、95℃水浴時用帶蓋的試管，以免反應液的蒸發(fā)。若
沒有帶蓋的試管可用冰箱保鮮膜蓋好，用橡皮筋扎好后
在保鮮膜上用針刺一小孔即可代替蓋子。
九、本試劑盒優(yōu)點：
1、本試劑盒中試劑均無刺激性氣味，對操作人員無任何毒
害。
2、快速準確，操作簡便，每小時可測 100 例以上樣本。
3、靈敏度高，血清或血漿樣品只需 0.1mL,或者更少。
4、再現(xiàn)性好，變異系數(shù) CV=2.0%，同一份標本數(shù)次測試結(jié)
果相差極微。
5、呈色穩(wěn)定，呈色后半天內(nèi)測吸光度不變。
6、試劑穩(wěn)定，保質(zhì)期一年；試劑三配制后避光室溫保存至
少 3 個月（顏色變成咖啡色即不可使用）。
7、血清樣品放置 4℃，3～5 天內(nèi)測試結(jié)果不變。-70℃以下
可保存 3 個月至半年。
8、測試面廣，可測血清（漿）、各種組織勻漿，培養(yǎng)細胞等。
9、主要原料均為進口，但價格適中。
10、不需昂貴與特殊儀器，只需恒溫水浴箱或者鋁鍋、鋁盆
開蓋煮沸，及 721、722、751、752 分光光度計任一型
號均可。
11、不受氣溫等外界因素的影響。是目前國內(nèi)MDA
測試方法。
微量丙二醛（MDA）測試盒
