酵母細(xì)胞總蛋白提取試劑盒試劑內(nèi)容： 

             試劑組成            （50 次）
             酵母細(xì)胞蛋白裂解液     50ml 
             酵母細(xì)胞漂洗液        120 ml 
             酵母細(xì)胞懸浮           50ml 
             100×蛋白酶抑制劑      0.6ml 
              50% 甘油             10ml 
               說明書               1 份 
  
酵母細(xì)胞總蛋白提取試劑盒儲存條件：   
本試劑在室溫干燥條件下，可保存 6 個月。酵母細(xì)胞懸浮、100×蛋白酶抑制劑和 50% 甘油 2-8℃保存。 
概述：      
1、總論：經(jīng)典的細(xì)胞蛋白質(zhì)分離流程由下述主要步驟組成：清洗組 織或細(xì)胞；裂解細(xì)胞；離心去沉淀獲得可溶性蛋白質(zhì)粗提物（可依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化特性特別的調(diào)配裂解緩沖液），目的蛋白質(zhì)是膜蛋白時用去垢劑處理；通過有機溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進一步純化，得到目的產(chǎn)物蛋白。 
 
2、本試劑盒用于從酵母細(xì)胞中快速、高效而溫和地抽提可溶性蛋白。采用本試劑處理，可以避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細(xì)胞的破壞。 
 
 
注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。      
1) 酵母細(xì)胞懸浮液含有高活性消解酶類，即使在30℃作用60 分鐘即可獲得滿意的溶解。但在4℃保存下。存放時間久后，可能會出現(xiàn)酶活性下降，因此，當(dāng)出現(xiàn)這種情況的時候，用戶可以適當(dāng)添加消解酶至10mg/ml. 
 
2) 若目的蛋白不穩(wěn)定，冰浴中孵育時間可以減少甚至取消，裂解液內(nèi)加入0.2 倍體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。 
 
3) 4℃保存。 

操作步驟：
     
1. 離心收集在選擇壓力下靜止培養(yǎng)的酵母培養(yǎng)物的沉淀（一般而言，12,000rpm 離心30 秒鐘，連續(xù)收集多次）酵母細(xì)胞, 按照每克酵母濕菌取用3ml 酵母細(xì)胞懸浮液的比例，于室溫將細(xì)胞懸浮起來后，然后放置于30℃保溫60-90分鐘。其間每20 分鐘顛倒混勻一次。（先懸浮起來，然后離心去除酵母細(xì)胞懸浮液）為了獲得高質(zhì)量的酵母蛋白，培養(yǎng)酵母的時間不宜過長，一般為12-24個小 時。 
由于培養(yǎng)的酵母菌液濃度不同,因此加入酵母細(xì)胞懸浮液后放置于37℃保溫的時間用戶可以根據(jù)實驗結(jié)果在處理的時間上進行調(diào)整,60分鐘只是一個參考值。 
如果酵母細(xì)胞懸浮液不夠，也可以用濃度大于10mg/ml 的消解酶代替。 
 
2． ．． ．離心除去酵母細(xì)胞懸浮液, 按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞漂洗液的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。 
 
3. 離心除去酵母細(xì)胞漂洗液, 按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞蛋白裂解液和50ul 100× 蛋白酶抑制劑的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。 
 
4．混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育10～20分鐘，同時輕輕搖動。 
 
5．細(xì)胞破碎后的勻漿液，根據(jù)您不同需要可以在12 000g 離心10min 到 100 000g 離心1h 范圍離心。沉淀棄去。上清即為含有目的蛋白質(zhì)的粗 提物。