細胞保存方法:
(一)細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對數生長期的細胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
8. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。
產品信息:
貨號 | CS-X2006 | 種屬 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁細胞 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
溫度 | 液氮 | 培養(yǎng)條件: | 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
鑒定 | STR鑒定正確 | 生長培養(yǎng)基 | DMEM+10%CS+1% P/S |
商品介紹:
產品名稱:3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細胞) 種屬 小鼠 年齡(性別) 胚胎 組織來源 胚胎 生長特性 貼壁細胞 細胞形態(tài) 成纖維細胞樣 背景描述 3T3-L1細胞是通過克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當3T3-L1細胞從快速分裂到長滿且接觸抑制時,3T3-L1細胞經過前脂肪向脂肪樣逆轉。培養(yǎng)液中,高血清含量可以促進3T3-L1細胞內脂肪的積累。 生物安全等級 1 生長培養(yǎng)基 DMEM+10%CS+1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 受體表達情況 insulin, expressed 保藏機構 ATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 60159 |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基,使細胞處于指數生長期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞,取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數細胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細胞懸液,并晃動試管,制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后,注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。
注意事項:
1)、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質,應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。
2)、細胞在液氮中可長期凍存無,而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。
3)、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級,無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級,以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲,可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
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