產(chǎn)品信息：
貨號 | CS-X2003 | 種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁細胞 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
溫度 | 液氮 | 培養(yǎng)條件: | 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
鑒定 | STR鑒定正確 | 生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
商品介紹：
產(chǎn)品名稱：293A (人胚腎細胞) 種屬 人類 年齡（性別） 胎兒 組織來源 胚胎腎 生長特性 貼壁細胞 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 生物安全等級 1 生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時間 ~40-60小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項 該細胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細胞團，為正?，F(xiàn)象，請按照收貨注意事項處理。 |
細胞保存方法：
（一）細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
注意事項：
1）、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質(zhì)，應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。
2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3）、注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。
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操作步驟：
1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。
2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。
