細胞名稱:小鼠單核巨噬細胞白血病細胞,RAW 264.7細胞
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞,RAW 264.7細胞
傳代方法:
收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài):如果沒長滿,將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內更換新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已經(jīng)長滿(約80%-90%)則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代方法:
1 棄去培養(yǎng)基,用不含鈣、鎂離子的PBS 洗1-2 次。
2 加1ml 0.25%的*(含0.02%EDTA),讓*與大部分細胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內,隨時觀察細胞狀態(tài)變化,待細胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。
懸浮細胞傳代方法:
可以直接傳代也可以離心法傳代。
1.直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
2.離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉移到離心管內,1000rpm,5 分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內,吹打細胞形成細胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。一般沒有特殊說明,細胞一般是一傳二。
凍存方法:
90%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
儲存:液氮中*保存。
注:1 觀察細胞在低倍鏡下觀察,便于整體估計細胞密度。
2.在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落,可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。
3.收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等,請盡快與我們。
常見問題及解決方案:
1、培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞*可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
2、細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。
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