LightShift 化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒的特點(diǎn):
• 檢測胞核抽提物中低豐度蛋白的理想選擇
• 靈敏度超越放射性檢測法
• 兼容之前建立的常規(guī)DNA-蛋白互作結(jié)合條件
• 包括EBNA對照系統(tǒng),幫助新用戶建立一個(gè)適當(dāng)?shù)臋z測體系,了解用于確定相互作用特異性的方法
LightShift EMSA檢測的原理與蛋白免疫印跡類似。*末端標(biāo)記的雙鏈DNA與細(xì)胞核提取物或純化的因子共同孵育,之后進(jìn)行非變性凝膠電泳。然后將DNA快速(30分鐘)轉(zhuǎn)印至帶正電的尼龍膜上,進(jìn)行紫外交聯(lián),然后使用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物檢測,再與底物孵育。從標(biāo)記到獲得結(jié)果的整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程可以在一天內(nèi)完成。
蛋白與DNA之間的相互作用對于DNA復(fù)制、重組和修復(fù)、轉(zhuǎn)錄和病毒組裝等許多細(xì)胞進(jìn)程具有關(guān)鍵調(diào)控作用。電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)是研究基因調(diào)控和確定蛋白:DNA之間相互作用的核心技術(shù)之一。
EMSA技術(shù)基于一個(gè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):即在非變性聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳過程中,蛋白:DNA復(fù)合物的遷移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白結(jié)合使DNA的遷移速率發(fā)生了偏移或延遲,這個(gè)方法也被稱為凝膠遷移或凝膠阻滯分析。在EMSA技術(shù)出現(xiàn)之前,蛋白:DNA之間相互作用主要是通過硝化纖維素膜過濾實(shí)驗(yàn)分析。
整個(gè)實(shí)驗(yàn)中需要實(shí)驗(yàn)者準(zhǔn)備的是已純化的末端*標(biāo)記的目標(biāo)DNA,待檢測的蛋白提取物,尼龍膜和基本電泳設(shè)備。目標(biāo)DNA可在合成的同時(shí)進(jìn)行5'或3'端*標(biāo)記,或在合成之后使用Thermo Scientific*3'末端DNA標(biāo)記試劑盒(產(chǎn)品貨號(hào)89818)進(jìn)行標(biāo)記。用戶可通過不同方法獲得胞核、胞質(zhì)或全細(xì)胞蛋白提取物,包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞質(zhì)蛋白提取試劑盒(產(chǎn)品貨號(hào)78833)。
北京優(yōu)尼康生物科技有限公司是Z早經(jīng)營進(jìn)口、國產(chǎn)生物科研儀器、試劑及耗材,提供技術(shù)服務(wù)的生物公司之一?,F(xiàn)經(jīng)營的品牌及相關(guān)產(chǎn)品如下:
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德國艾本德eppendorf 移液器、分配器等
法國Hyphen Biomed 的出血、凝血類試劑 ;
美國BioProducts MD 的PEDF(人眼色素上皮衍生因子);
德國IBL international 新蝶呤試劑盒、兒茶酚胺試劑盒;
美國TYLER 的篩分儀;
BD公司的基質(zhì)膠,細(xì)胞篩網(wǎng)等;
法國Interscience 均質(zhì)器、重量稀釋器、自動(dòng)螺旋接種儀、均值袋、均值夾、開袋器、架子等
德國Wiggens 攪拌器、培養(yǎng)箱、振蕩器、蒸發(fā)器(氮吹儀)菌落計(jì)數(shù)器本生燈、均質(zhì)器等
德國Chemvck 防腐隔膜泵、無油泵、真空泵、蠕動(dòng)泵等
瑞士Keller 小型快速玻璃珠滅菌器、玻璃珠等
美國Millpore 細(xì)胞電阻儀、超濾管、膜、針頭濾器等
美國 BioSpec研磨珠均質(zhì)器、手持勻漿機(jī)等
自產(chǎn)鎳洛合金接種環(huán)、接種針、核酸染料等