關于客戶在收到細胞后正確的處理方法

子宮內(nèi)膜癌細胞，Ishikawa細胞

 有經(jīng)驗和剛剛從事細胞培養(yǎng)工作的人員都應該認真仔細地詢問下細胞提供方提供的建議，提前了解所要培養(yǎng)細胞的詳細資料，準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導致對細胞處理不當，或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。

子宮內(nèi)膜癌細胞，Ishikawa細胞

 1.收到細胞，*時間要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以*的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

2.當通過上一步的觀察，細胞初步?jīng)]有任何問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下，會調(diào)整為靜止期，或者慢速生*，必須恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生*的狀態(tài)，在對數(shù)生*進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。

3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，保證每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，*次處理也可以依照第二種情況。

收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)：

如果沒長滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培

養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細胞已經(jīng)長滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS 洗1-2 次。

2 加1ml 0.25%的*（含0.02%EDTA），讓*與大部分細胞接觸后

放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時觀察細胞狀態(tài)變化，待細胞大部分變圓后加

*培養(yǎng)基終止消化。

3 一般沒有特殊說明，細胞一般是一傳二。

凍存方法：

70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲存：液氮中*保存。

注1 觀察細胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落，可離

心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等，請及時與我們。

，還可供應細胞如下：