Mo-MuLV感染的3T3培養(yǎng)細(xì)胞注意事項:
實驗進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)0分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)Mo-MuLV感染的3T3無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進(jìn)行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
定期檢測下列項目:5.CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。5.3.無菌操作臺內(nèi)之airflow壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000小時/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin:750),定期更換水槽的水
粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過個月,如在-20度存放時間可長一些,但也不要超過3-4個月,可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,細(xì)胞嬌弱,放置時間不宜過長。
開紫外線照射臺的時候,就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后,找個毛巾擦干上面的水。
細(xì)胞 停滯期(Stagnate phase) 細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后,如不及時進(jìn)行傳代,細(xì)胞就會停止增殖,進(jìn)入停止期。此時細(xì)胞數(shù)持平,故也稱平臺期(Plateau phase)。停滯期細(xì)胞雖不增殖,但仍有代謝活動。如不進(jìn)行分離傳代,細(xì)胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒,出現(xiàn)形態(tài)改變,貼壁細(xì)胞會脫落,嚴(yán)重的會發(fā)生死亡,因此,應(yīng)及時傳代。
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固藍(lán)B鹽,堅牢藍(lán)B鹽,重氮藍(lán)B鹽,藍(lán)光重氮色鹽藍(lán),lv"化四氮鄰二甲氧基ben"胺,F(xiàn)ast Blue B salt
鄰聯(lián)茴香胺,聯(lián)大茴香胺,二甲氧聯(lián)ben"胺,3,3′-二甲氧基-4,4′-二氨基聯(lián)ben",3,3-二甲氧基聯(lián)ben"胺,3,3'-二甲氧基-,'-聯(lián)ben"-4,4'-二胺,鄰二茴香胺,3,3'-Dimethoxybenzidine
鄰聯(lián)茴香胺鹽suan"鹽,聯(lián)大茴香胺鹽suan"鹽,3,3’-二甲氧基聯(lián)ben"胺鹽suan"鹽,聯(lián)大回香胺鹽suan"鹽,快藍(lán)B,二鹽suan"鄰聯(lián)茴香胺,o-Dianisidine dihydrochloride
莧菜紅,suan"性紅7,萘酚紅,偶氮品紅S,-(4′-磺基-′-萘偶氮)--萘酚-3,6-二磺suan"三鈉鹽,雞冠花紅,藍(lán)光suan"性紅,對磺基萘偶氮-R-鹽,Amaranth
紫脲suan"銨,氨基紫色suan",紅紫suan"銨,骨螺紫,紫尿suan"胺,5,5′-次氮基二巴比土suan"銨鹽,Murexide
鄰甲,鄰甲酚呋酞, -甲, 3,3′-二甲基,3,3-雙(4-羥基-3-甲基ben"基)-(3H)-異ben"并呋喃酮,o-Cresolphthalein
鄰甲絡(luò)合劑,N,N'-[(3-氧代-(3H)-異ben"并呋喃基亞基]雙[(6-羥基-5-甲基-3,-亞ben"基)亞甲基]雙[N-(羧基甲基)甘氨suan"],酞紫,金屬酞,紫,-甲絡(luò)合劑,3',3''-雙[[雙(羧甲基)氨基]甲基]-5', 5''-二甲基,o-Cresolphthalein complexon