實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細胞簡介:
兔牙髓干分離自牙髓組織;牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi)。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似,牙冠部髓腔較大,稱髓室,牙根部髓腔較細小,稱根管,根尖部有小孔,稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經(jīng)、血管,淋巴和結(jié)締組織,還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細胞,其作用是造牙本質(zhì)。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機體抵抗力的差異,出現(xiàn)不同的病理變化,在臨床上會表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征。牙髓充血狀況持續(xù)時間較長后,轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥。間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)來源于胚胎時期的中胚層組織,具有很強的自我復制和多向分化潛能,具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞及肌細胞等多種終末細胞定向分化的能力,運用 MSCs來修復軟骨損傷具有很好的應用前景,目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細胞。
產(chǎn)品名稱 | 組織來源 | 牙髓 | |
英文名稱 | Rabbit Dental Pulp Stem Cells | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
方法簡介:
實驗室分離的兔牙髓干采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔牙髓干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔牙髓干體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1:2傳代 。
9.注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠α半乳糖基抗原試劑盒 小鼠α半乳糖基抗原試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠α半乳糖基抗原試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠α半乳糖基抗原試劑盒、小鼠α半乳糖基抗原eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
小鼠αN已?;咸擒彰冈噭┖?span> 小鼠αN已?;咸擒彰冈噭┖?span> 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠αN已?;咸擒彰冈噭┖?,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠αN已?;咸擒彰冈噭┖?、小鼠αN已?;咸擒彰?span>eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒 小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒、小鼠αL巖藻糖苷酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒 小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒、小鼠αL艾杜糖苷酸酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白A(IgA)試劑盒
humanProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit 人前列腺素E1(PGE1)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanai-parotidductaibody試劑盒人抗腮腺管抗體(ai-parotidductAb)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細胞壁束縛酸性蔗糖轉(zhuǎn)化酶(acidinvease)活性比色法定量試劑盒(胞壁)20次
Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains1,Tie1ELISAKit人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶1(Tie1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein
Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)
CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein
FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白
REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)
Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)
FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白
EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein
REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)
CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein
兔牙髓干細胞大鼠肌原纖蛋白1(FBN1)試劑盒 ,英文名: FBN1 ELISA Kit
Mouse histone deacetylase (HD) ELISA Kit 小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)試劑盒
RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforFXELISAKit大鼠Ⅹ
細胞精(arginine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISAKit大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒規(guī)格:96T/48T