實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔肺小動脈平滑肌分離自肺小動脈組織；小動脈（smallartery），管徑在0.3-1mm之間，小動脈包括粗細不等的幾級分支，也屬肌性動脈。較大的小動脈，內膜有明顯的內彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關”。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚，當平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細血管內，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升。反之，當小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動脈（terminal arteri-ole）的口徑為20-30μm；后小動脈（metar-teriole），又稱毛細血管前小動脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12-15μm。管壁內均有較稀疏的平滑肌，在毛細血管前小動脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細血管前括約?。?span>precapillary sphinc-ter），其收縮或舒張，可調節(jié)真毛細血管的血流量，是調節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關”。

方法簡介：

實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔肺小動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠促腎上腺皮質激素釋放因子(CRF)檢測試劑盒 ，英文名： CRF ELISA Kit

Mouse 15 lipoxygenase (15-LO/LOX) ELISA Kit 小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)檢測試劑盒

ELISA 小鼠骨成型蛋白受體1A(mouse BMP-R1A)  進口分裝

CLIAKitforLIFR(Mouseleukemiainhibitoryfactorreceptor)ELISAKit小鼠白血病抑制因子受體

通用型ECL化學發(fā)光顯影試劑盒10次

ELISAKit17-OHCS雞17羥皮質類固醇

Spike中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike protein fragment (RBD, aa 367-606, His 標簽) Protein

Tau protein 微管相關蛋白(抗原 0.5mgTau protein 微管相關蛋白(抗原)

CTLA4重組人 CTLA4 / CD152 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

IFNL1 Protein Human 重組人 IL29 / IFNL1 蛋白

TREM1 Protein Human 重組人 TREM1 蛋白 (His & Fc 標簽)

Tau protein 微管相關蛋白(抗原 0.5mgTau protein 微管相關蛋白(抗原)

IFNL1 Protein Human 重組人 IL29 / IFNL1 蛋白

Spike中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike protein fragment (RBD, aa 367-606, His 標簽) Protein

TREM1 Protein Human 重組人 TREM1 蛋白 (His & Fc 標簽)

CTLA4重組人 CTLA4 / CD152 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

小鼠(HYD)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human urinary free coisol (UFC) ELISA Kit 人尿游離(UFC)檢測試劑盒

HumanMyosinlightChain,MLCELISAKit 人肌球蛋白輕鏈(MLC)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineapigovalbuminspecificIgG,OVAsIgG檢測試劑盒豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVAsIgG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒50次

Mousebonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit小鼠骨形成蛋白(BMPs)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔肺小動脈平滑肌細胞糖化血紅蛋白（）測試盒   Glycosylated hemoglobin () test kit

肝/肌糖元測試盒   Liver / muscle glycogen test kit

β-葡萄糖酸苷酶測試盒   Beta - glucose - acid - enzyme test case

紅細胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測試盒   Erythrocyte NADH high iron hemoglobin reductase test kit