產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：Caspase-4 Assay Kit (Colorimetric)
產(chǎn)品中文名稱：Caspase-4 活性分析試劑盒（比色法）
規(guī)格：20T/50T/100T
貨號(hào)：EY-01X8537
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):
• 簡(jiǎn)單，優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方法。
• 操作方便快捷。
• 檢測(cè)早/中期的細(xì)胞凋亡。
保存建議:請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)中各個(gè)組件的存儲(chǔ)條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個(gè)月。
運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸
背景
Caspase全稱為含半的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一類蛋白酶家族，成員較多，在人類，已經(jīng)鑒定了11種不同的caspase，根據(jù)其蛋白酶序列的同源性可分為3個(gè)亞族：Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亞族包括Caspase-2、9； Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。起細(xì)胞凋亡執(zhí)行者作用的是caspase3,6,7。
本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。
2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體
1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。
(四)誘導(dǎo)表達(dá)
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
公司正在出售的產(chǎn)品：
ⅣD組0脂酶A2(PLA2G4D)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Group IVD (PLA2G4D)
ECE2 Protein Human 重組人 ECE-2 蛋白
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HumanangiotensionIreceptorAibody,ANG-ⅠRaibody檢測(cè)試劑盒人血管緊張素Ⅰ受體抗體(ANG-ⅠR)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
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小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(HGFR/c-MET)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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小鼠甘油三酯（TG）檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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MousemembraneIgA,mIgAELISAKit 小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumaecombinationactivatinggene1,RAG-1ELISAKit人重組激活基因1
通用型豬輪狀病毒(Porcinerotavirus)試劑盒20次
ELISAKitBGP/Gehrelin大鼠腦腸肽
Caspase-4 活性分析試劑盒（比色法）CD59A重組小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 Protein
ⅣD組0脂酶A2(PLA2G4D)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Group IVD (PLA2G4D)
FGF17重組人 FGF17 蛋白 Protein
ECE2 Protein Human 重組人 ECE-2 蛋白
IL1B Protein Rat 重組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form)
