Dispase II 分散酶II（中性蛋白mei）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白mei） | MX1006-100MG | 100mg | 550 |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白mei） | MX1006-1000MG | 1g | 2150 |
產(chǎn)品描述
中性蛋白mei（Neutral protease），商業(yè)名稱Dispase II，也稱分散酶II，普遍用于不同組織和器官中的細胞分離。Dispase II是一種非特異性金屬蛋白酶，能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質(zhì)釋放單細胞培養(yǎng)物（原代細胞培養(yǎng)物）或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上（傳代培養(yǎng)）。另外，還能預防懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的成團現(xiàn)象。Dispase II極其穩(wěn)定，不會受溫度、pH和血清內(nèi)容物的干擾；通過螯合劑或稀釋很容易失活；酶活溫和，對細胞損傷小，可良好維持細胞膜完整性。
本品來源于多粘芽孢桿菌（Bacillus polymyxa），無支原體或其他動物病毒污染。以非無菌的凍干粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白，使用前需進行除菌。常用工作濃度范圍為0.6-2.4 U/ml。
產(chǎn)品特性
1） EC NO：3.4.24.4
2） 同義名：Neutral protease中性蛋白mei
3） 比活力：≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)
4） 酶活力單位定義：在37℃，pH 7.5的反應條件下，1min內(nèi)釋放福林酚陽性反應氨基酸和多肽量相當于1 μmol (181 μg)酪氨suan所需的酶量即為一個活力單位。
5） pH：6.0 - 8.5
6） 激活劑：Ca2+為2mM，該酶已含足量Ca2+確保酶活力。
7） 抑制劑： EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金屬。該酶活性不受血清干擾。
保存與運輸方法
保存：2-8℃干燥保存，至少1年有效。
運輸：冰袋運輸。
使用方法
一、儲存液和工作液制備
1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍干粉，配制成10mg/ml的儲存液，用0.22µM濾膜過濾除菌。本儲存液置于2-8℃，2周穩(wěn)定；根據(jù)單次用量分裝凍存，高達2個月穩(wěn)定，避免反復凍融。
2）工作液制備：使用時用合適的細胞培養(yǎng)液將儲存液稀釋到工作液濃度即可，常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度。具體使用濃度請根據(jù)自身實驗體系或參考文獻來調(diào)整。
二、組織分離
1）用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次；
2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒并37℃孵育進行組織解離；
3）置于水平搖床上，低速轉(zhuǎn)動，37℃孵育直至組織完quan解離；【注意】：第一次使用Dispase II，通過細胞計數(shù)來確定總反應時間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時間，不過孵育時間幾小時也不會有副作用。
4）若有需要，將消化產(chǎn)物用無菌不銹鋼網(wǎng)過篩，從而分離解散細胞和殘留組織，或當更大片段組織靜置到管底，輕輕倒出上層細胞。若需要進一步解離，則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。
5）低速離心收集細胞，吸掉酶工作液；
6）用適當?shù)募毎囵B(yǎng)液重懸細胞，置于正常預優(yōu)化條件下培養(yǎng)。
三、細胞亞培養(yǎng)
1）用37℃預熱的Dispase II工作液完quan覆蓋細胞，置于37℃孵育5min；
2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；
3）顯微鏡觀察以確定消化情況，若有需要，可再孵育15min；
4）用細胞培養(yǎng)液重懸細胞，低速離心并用培養(yǎng)基清洗細胞幾次；
5）用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞；
6）按照常規(guī)方法進行分盤傳代。
注意事項
1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商標。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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