產(chǎn)品描述：

膠原酶IV 是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和gan氨酸（Gly）之間的肽鍵。

使用說明：

本品為 IV 型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion

units），特別適用于胰島組織的消化。

在 37℃，pH7.5 的條件下，5 h 內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當于 1 µM L-liang氨酸的

酶量定義為 1 個酶活力單位。

IV 型膠原酶應(yīng)以粉末形式在 2-8℃下保存，直到可以使用為止?？梢詫?/span>

IV 型膠yuan酶溶液等分并保存在 -20℃，但不應(yīng)反復(fù)凍融。

使用方法：

1、膠原酶儲存液的配制

向每管 100 mg 的膠原酶中加入 1 mL 的含 Ca2+、Mg2+的 HBSS（Hank’s pingheng鹽溶液，含 Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成

100 mg/mL（即 100×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的 0.22 μm 的濾膜過

濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。

使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度

為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為 1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定

的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻資料確定所需的佳工作濃度。

2、組織的分離

1.使用無菌手術(shù)dao或剪刀將組織切成 3-4 mm 大小的組織塊；

2.利用含 Ca2+、Mg2+的 HBSS 洗滌組織塊數(shù)次；

3.加入足量的含 Ca2+、Mg2+的 HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需

要工作濃度；

4.于 37℃孵育 4-18 h。消化時使用水平搖床以及用 3 mM 的 CaCl2 補充消化

可以提高消化效率。

5.已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未全解離的

組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于 37℃繼續(xù)孵育；

6.利用不含膠原酶的 HBSS 洗滌收集的細胞數(shù)次；

7.細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。

8.于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。 

3、器官灌注

1.向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl2

有助于提高分離效率；

2.按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；

3.將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細胞

或小片段組織塊與較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原

酶工作液于 37℃進一步孵育；

4.利用不含膠原酶的 HBSS 洗滌收集的細胞數(shù)次；

5.細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。

6. 于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。 

關(guān)于膠原酶IV型的要點： 

功能：膠原酶IV型是一類金屬蛋白酶，能夠特異性地切割和降解IV型膠原蛋白，這在組織修復(fù)、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起著重要作用。

應(yīng)用：在研究中，膠原酶IV型可用于研究細胞外基質(zhì)的降解機制，以及在腫瘤生物學(xué)中研究腫瘤細胞如何通過降解基底膜來侵襲周圍組織。

來源：膠原酶IV型可以由多種細胞類型產(chǎn)生，包括成纖維細胞、上皮細胞、腫瘤細胞等。 

活性：這種酶的活性通常依賴于特定的金屬離子，如鋅離子，它們是酶活性中心的一部分。 

抑制：在某些情況下，可能需要抑制膠原酶IV型的活性，以防止過度的組織損傷或控制病理過程。這可以通過使用特定的抑制劑來實現(xiàn)。 

臨床意義：在某些疾病中，如腫瘤、炎癥性疾病和自身免疫性疾病，膠原酶IV型的活性可能異常升高，這可能導(dǎo)致組織損傷和疾病進展。

研究：膠原酶IV型的研究有助于開發(fā)新的治療方法，如通過抑制其活性來治療某些疾病。 

產(chǎn)品形式：在實驗室研究中，膠原酶IV型通常以商業(yè)化的酶制劑形式提供，可以用于各種生物學(xué)實驗。