ReadiUse 6色 人 TBNK抗體試劑盒利用干燥的多色珠子通過流式細胞術(shù)鑒定淋巴細胞亞群、CD4+ T 細胞、CD8+ T 細胞、B 細胞和 NK 細胞。 該試劑含有針對人 CD3、CD4、CD8、CD16、C19、CD45 和 CD56 的熒光標記抗體。 該試劑盒旨在以“裂解/免洗”形式用于分析人類全血。 還包括用于識別死細胞的活性染料和用于確定淋巴細胞亞群細胞濃度的熒光計數(shù)珠的數(shù)量。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的ReadiUse 6色 人 TBNK抗體試劑盒。
操作方案
概述
儀器
ReadiUse 6-Color Human TBNK Antibody Kit 設(shè)計用于配備適當計算機硬件和軟件的流式細胞儀。 流式細胞儀必須配備：
1.488 nm 藍色激光和 635 nm 紅色激光
2.能夠檢測光散射（正面和側(cè)面）
3.488nm 激光激發(fā)時的四色熒光通道：FITC、PE、PerCP-Cy5.5 和 PE-Cy7
4.635nm 激光激發(fā)時的雙色熒光通道：APC 和 APC-Cy7
5.可選：405nm 紫激光，配備 455nm 檢測通道
規(guī)格
| 激發(fā)光 | 發(fā)射光線 | 綴合反應(yīng) | 推薦通道 (例如: Cytek Aurora) |
| Blue | 520 nm | CD3 (SK7) - iFluor™ 488 | B2 (518-529 nm) |
| Blue | 575 nm | CD16 (3G8) - PE, CD56 (MY31) - PE | B4 (560-583 nm) |
| Blue | 700 nm | CD45 (2D1) - PerCP-iFluor™ 680 | B9 (688-707 nm) |
| Blue | 780 nm | CD4 (SK3) - PE-iFluor™ 750 | B13 (772-795 nm) |
| Red | 665 nm | CD19 (SJ25C1) - APC | R1 (652-669 nm) |
| Red | 780 nm | CD8 (SK1) - APC-iFluor™ 750 | R7 (772-795 nm) |
| Violet | 455 nm | NucPO-1 | V3 (451-466 nm) |
防范措施
1.該試劑含有疊dan化鈉。 吞食疊dan化鈉是有害的 (R22)。 如果吞食，請立即就醫(yī)。 與酸接觸會釋放有毒氣體。 疊氮化物在處理過程中應(yīng)用大量水沖洗，以避免鉛或銅管道中的沉積物。
2.10X Lyse/Fix Buffer（組分 B）含有甲醛。 甲醛有毒，避免吸入或接觸。
3.所有血液樣本都被視為生物危害品。請按照當?shù)叵嚓P(guān)規(guī)定處理。
工作溶液的配制
1X 裂解/修復(fù)緩沖液
通過向 10X 裂解/固定緩沖液瓶（組分 B）中加入 3.0 mL 去離子水來制備 1X 裂解/固定緩沖液。 將瓶子混合并重新標記為 1X Lysis/Fix Buffer。
樣品制備
1.制備血細胞樣本，可以使用在 EDTA 管中收集的新鮮血液或濃度不超過 106 個細胞/mL 的分離 PBMC。
2.從袋中取出所需數(shù)量的試劑管并重新密封袋。
3.全部混合樣品并將 50 μL 的樣品準確分配到試劑管中。注意樣品分配的準確性將影響確定的細胞濃度的準確性。
4.輕輕渦旋每個管 30 秒，以確保干燥的試劑全部溶解。
5.在室溫下孵育 20 分鐘。保護管免受直射光。
6.在每個試管中加入 450 µL 1X Lysis/Fix Buffer 并渦旋 10 秒。將試管避光至少 15 分鐘。
7.以低速渦旋樣品管并加載到細胞儀上進行分析。 該抗體試劑盒，設(shè)計用于裂解/免洗形式。如果在分析前清洗樣品，將失去確定細胞濃度的能力。
8.流式細胞儀采集：根據(jù)制造商的說明啟動和操作流式細胞儀。使用適當?shù)募毎麅x專用軟件分析數(shù)據(jù)。
