ReadiPrep 線粒體/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒提供了從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離線粒體和細(xì)胞質(zhì)組分的便捷方法。 分離的線粒體是完整的，可以用線粒體標(biāo)記（例如MitoLite Green）進(jìn)行陽(yáng)性染色。 分離的線粒體保留其生物學(xué)活性，并與許多下游應(yīng)用兼容，包括研究線粒體呼吸，線粒體膜電位，凋亡，mtDAN和mtRNA以及線粒體蛋白譜分析等。該試劑盒提供了兩種分離線粒體的選擇。 一種選擇是利用基于試劑的方法，該方法允許同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣品制備。 第二種選擇是利用Dounce均質(zhì)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的ReadiPrep 線粒體/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
用PBS洗滌細(xì)胞
加入2 mL隔離緩沖液
在冰上孵育10分鐘
使用均質(zhì)器均質(zhì)化細(xì)胞或添加試劑A。
7000g離心10分鐘
去除上清液（細(xì)胞質(zhì)部分）
將沉淀重懸于隔離緩沖液中
7000g離心10分鐘
將沉淀重懸于測(cè)定緩沖液（線粒體級(jí)分）中
實(shí)驗(yàn)步驟
1.用冷PBS洗滌細(xì)胞一次。 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，請(qǐng)通過(guò)離心收集細(xì)胞。
2.向細(xì)胞中加入2 mL分離緩沖液（組分A），并在冰上孵育10分鐘。
3.可以通過(guò)兩種方式提取細(xì)胞質(zhì)。
①：將40 µL試劑A（組分B）加入混合物中，渦旋并在冰上孵育10分鐘。
②：使用Dounce組織研磨機(jī)勻漿4-5次，使細(xì)胞勻漿。
4.在4°C下以600 g離心10分鐘，收集上清液，在4°C下以7,000 g離心10分鐘。 上清是細(xì)胞質(zhì)部分。
5.將沉淀重懸于1 mL分離緩沖液（組分A）中，并在4°C下以7,000 g離心10分鐘。
6.丟棄上清液，并根據(jù)下游應(yīng)用將沉淀重懸在適當(dāng)?shù)臏y(cè)定緩沖液中。
7.蛋白質(zhì)濃度可以通過(guò)Amplite 熒光熒光胺蛋白質(zhì)定量試劑盒（Cat＃11100）進(jìn)行定量。
