人血清白蛋白（HSA）是人血漿中酸性藥物的重要載體之一，并且可逆地結(jié)合大量不同的化合物。已為HSA確定了幾個(gè)不同的配體結(jié)合位點(diǎn)。其中，Site I被確定為主要的藥物結(jié)合位點(diǎn)之一。人血清白蛋白（HSA）I位結(jié)合檢測(cè)試劑盒是一種基于熒光的高通量測(cè)定法，用于確定小分子與HSA的結(jié)合。該測(cè)定法基于新型熒光探針HSA Blue™S1。它的特征是具有特別的光譜和結(jié)合特性，可與HSA的位點(diǎn)1結(jié)合。HSA Blue™S1在蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)和蛋白質(zhì)未結(jié)合狀態(tài)之間顯示出較大的熒光強(qiáng)度差異。在HSA Blue™S1存在下，小分子競(jìng)爭(zhēng)HSA結(jié)合會(huì)導(dǎo)致熒光強(qiáng)度低。該測(cè)定法可用作高通量篩選工具，以確定在站點(diǎn)I處與HSA的總結(jié)合。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的人血清白蛋白（HSA）I位結(jié)合檢測(cè)試劑盒。
適用儀器
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| Ex: | 365 nm |
| Em： | 480 nm |
| Cutoff： | 435 nm |
| 推薦孔板: | 純黑色孔板 |
| 讀取模式: | 頂部讀取 |
樣品分析方案
概述
在微孔板孔中制備樣品
從樣品中取出液體
添加鬼筆環(huán)肽-iFluor 488標(biāo)記溶液（100μL/孔）
在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘
清洗細(xì)胞在顯微鏡下觀察樣品
注意：將小瓶加熱至室溫并在打開(kāi)前短暫離心。
儲(chǔ)備溶液配制
將100 µL DMSO（組分D）加入HSA Blue™S1（組分A）中并充分混合。
注意：將未使用的HSA Blue™S1儲(chǔ)備溶液分裝成一小份保存在-20°C下，以避免凍融循環(huán)。
工作溶液配制
將50 µL HSA Blue™S1儲(chǔ)備溶液加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意：HSA Blue™S1工作溶液不應(yīng)儲(chǔ)存，應(yīng)立即使用。
注意：5 mL HSA Blue™S1工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。
將250 µL HSA溶液（組分C）加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中并充分混合。
注意：5 mL HSA工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。
使用HSA分析緩沖液（組分B）將藥物原液在3X工作溶液中稀釋至所需濃度。
注意：對(duì)于此處提到的方案，每孔的建議體積為50 µL。
操作步驟
以下方案可用作參考，實(shí)際應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
在孔中加入50 µL HSA Blue™S1工作溶液。
在孔中加入50 µL HSA工作溶液。
在各自的孔中加入50 µL藥物工作溶液。（總體積= 150 µL /孔）。
將樣品在室溫下孵育30分鐘。
使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 365/480 nm（截止= 435 nm）處檢測(cè)熒光的增加。
