Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒

Pierce BCA 蛋白定量試劑盒是一種雙組分、高精度、兼容去垢劑的蛋白定量試劑，可準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度。對(duì)于蛋白研究中的常見(jiàn)樣品類(lèi)型，Pierce BCA 試劑均可準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度。Pierce BCA 試劑可用于評(píng)估全細(xì)胞裂解物、親和柱分離組分和蛋白樣品純化的產(chǎn)量，還可在工業(yè)應(yīng)用中用于蛋白污染的監(jiān)測(cè)。與大多數(shù)染料結(jié)合法相比，BCA蛋白定量法受蛋白質(zhì)氨基酸組成差異的影響更小，因此有更高的蛋白間定量一致性。

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BCA 蛋白定量試劑盒的特點(diǎn)包括：
•比色法測(cè)量—可以目測(cè)評(píng)估，也可使用標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀 (562 nm) 進(jìn)行測(cè)量
• 高度一致性—與染料結(jié)合法 (Bradford) 相比，BCA定量法的蛋白間差異更小
• 兼容性強(qiáng)—在大多數(shù)離子型和非離子型去污劑的常見(jiàn)濃度下，性能不受影響
• 定量時(shí)間—30 分鐘孵育；與傳統(tǒng) Lowry 法相比，操作更簡(jiǎn)單，且檢測(cè)速度快 4 倍
• 檢測(cè)范圍—BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 µg/mL
• 高靈敏度—使用增強(qiáng)方案，可檢測(cè)濃度低至 5 µg/mL 的樣品

測(cè)定工作原理
BCA 蛋白測(cè)定法是在堿性環(huán)境下，通過(guò)蛋白將 Cu2+ 還原為 Cu1+ ，再通過(guò)二辛可寧酸 (BCA) 來(lái)檢測(cè)亞銅陽(yáng)離子 (Cu1+) 。步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合，形成淺藍(lán)色復(fù)合物，這一過(guò)程被稱(chēng)為雙縮脲反應(yīng)。在該反應(yīng)（雙縮脲反應(yīng)）中，由三個(gè)或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復(fù)合物。

在顯色反應(yīng)的第二步中，BCA 與步形成的還原型（亞銅）陽(yáng)離子發(fā)生反應(yīng)。兩分子 BCA 與一個(gè)亞銅離子螯合，產(chǎn)生深紫色反應(yīng)產(chǎn)物。BCA/銅復(fù)合物是水溶性的，在 562 nm 處具有強(qiáng)線性吸收，且吸收度隨蛋白質(zhì)濃度增加而升高。該復(fù)合物的靈敏度（檢測(cè)下限）大約是個(gè)反應(yīng)中淡藍(lán)色的 100 倍。

反應(yīng)很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四個(gè)氨基酸殘基（半胱an酸、胱an酸、酪an酸和色an酸）的影響。然而，不同于考馬斯染料結(jié)合法，肽鏈也有助于顏色形成，因此可將不同蛋白間的測(cè)量差異降至zui低

Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒