實(shí)現(xiàn)常規(guī)熒光共聚焦成像和快速光譜成像的結(jié)合
隨著科研人員需求的不斷增加,探測(cè)到更多的信號(hào)甚至是光譜信息變得越來越必要,尤其在區(qū)分顏色比較接近的熒光的時(shí)候。創(chuàng)新的A1si激光共聚焦顯微鏡帶給用戶的靈活性,高速度以及光譜功能,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出常規(guī)共聚焦顯微鏡。配備的常規(guī)熒光探測(cè)器和光譜探測(cè)器,可以滿足多種科研領(lǐng)域的應(yīng)用需求。
單次掃描即可獲得320nm帶寬的光譜圖像
波長(zhǎng)分辨率可以是2.5, 5,和 10 nm. 選用10 nm分辨率時(shí), 單次掃描可獲得的波長(zhǎng)范圍高達(dá)320 nm,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其他類似系統(tǒng)。
1.簡(jiǎn)單,靈活的顯微鏡控制
只需單擊一個(gè)圖標(biāo),即可實(shí)現(xiàn)目鏡觀察和共聚焦拍攝之間的光路切換。通過A1si的系統(tǒng)軟件,用戶可以輕松控制顯微鏡的各個(gè)部件,將更多的時(shí)間用于拍攝圖像。
2.透射光拍攝
在拍攝光譜圖像和標(biāo)準(zhǔn)共聚焦圖像的同時(shí),A1si還可以拍攝包括DIC,明視場(chǎng),相差在內(nèi)的透射光圖像,以便在組織和細(xì)胞中更好的進(jìn)行熒光標(biāo)記的定位。
3.FRAP觀察
通過macro程序,可以進(jìn)行FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching光漂白后的熒光恢復(fù)) 實(shí)驗(yàn). 激光精確定位到用戶的任意區(qū)域(圓形,矩形,任意多邊形,點(diǎn),線,甚至環(huán)形)進(jìn)行光漂白。其他FRAP技術(shù),包括iFRAP (interval FRAP) 和FLIP (Fluorescence loss in Photobleaching)同樣得到支持。
4.對(duì)光譜圖像進(jìn)行時(shí)間動(dòng)態(tài)記錄
由于單次拍攝即可得到全光譜圖像,所以A1si可以對(duì)光譜圖像進(jìn)行動(dòng)態(tài)拍攝。拍攝時(shí)間序列的模式有:模式/固定時(shí)間間隔模式/用戶自定義拍攝時(shí)間表模式)
5.對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行光譜拆分,消除串色
A1si 軟件可以將不同熒光探針的信號(hào)清楚地拆分開,包括光譜接近,大范圍重疊的熒光信號(hào)(比如CFP, RFP, YFP,和 Alexa488). 在觀察多重?zé)晒馊旧珌矶ㄎ坏鞍追肿樱?FRET 實(shí)驗(yàn)時(shí),這個(gè)功能非常有用.通過光譜拆分,還可以清除掉自發(fā)熒光信號(hào)。
6.高效率的熒光透過技術(shù)
熒光光纖和探測(cè)器表面都使用了高效防反射涂層,將熒光信號(hào)的損失降到,實(shí)現(xiàn)光路的高透過率。
7.高波長(zhǎng)分辨率
通過使用精密設(shè)計(jì)的衍射光柵,可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)2.5nm的光譜分辨率.此外還有5nm 和 10nm分辨率可選。不同的分辨率可以分別用來拆分光譜重疊的探針或同時(shí)對(duì)4個(gè)或更多的探針進(jìn)行拍攝。
8.采用偏光控制技術(shù)的光譜探測(cè)器
Nikon的DEES (Diffraction Efficiency Enhancement System衍射效率增強(qiáng)系統(tǒng)) 技術(shù)可以對(duì)偏振光進(jìn)行控制,從而實(shí)現(xiàn)亮度的。通過調(diào)整偏振光方向,衍射光柵的效率得到化,從而在從藍(lán)到紅的整個(gè)可見光范圍內(nèi)提高廣譜數(shù)據(jù)的亮度和線性。
9.拍攝到真實(shí)的熒光顏色
由于采用了新的精確矯正技術(shù),而且光譜分辨率和針孔大小無(wú)關(guān),A1si可以精確探測(cè)到光譜信號(hào),得到真實(shí)顏色。同其他的偽彩色系統(tǒng)相比,A1si可以實(shí)時(shí)觀察到真彩色的樣本。
用 A1si得到的廣譜數(shù)據(jù)和探針制造商提供的數(shù)據(jù)非常接近。
10.把對(duì)活細(xì)胞和組織的影響降到
通過單次激發(fā)就可以得到全光譜圖像,因此激光強(qiáng)度和PMT增益的調(diào)節(jié)變得簡(jiǎn)單而快速。同時(shí)把熒光信號(hào)的衰減以及激光對(duì)標(biāo)本的損傷降到。對(duì)于活細(xì)胞和組織,A1si是一套“溫柔”的系統(tǒng)。
11.同時(shí)拍攝32通道的光譜圖像
A1si 采用了32 通道PMT,并革新了多重高速數(shù)字轉(zhuǎn)換電路和LVDS(Low Voltage Differential Signal低壓差分信號(hào))高速串行傳輸技術(shù),創(chuàng)造性地實(shí)現(xiàn)了單詞掃描得到32通道光譜信息,大大減少了拍攝時(shí)間,并實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)觀察。
12.雙積分信號(hào)處理
新開發(fā)的DISP (Dual Integration Signal Processing雙積分信號(hào)處理) 技術(shù)提高了電子效率,避免了模/數(shù)轉(zhuǎn)換過程中熒光信號(hào)的損失。整個(gè)曝光期間,熒光信號(hào)得到全程記錄,有效提高了信噪比。