美國BD FACSCanto II流式細胞儀液流車可以裝載大的液體桶,用于儀器的運行和維護。在樣品獲取時,液流車產(chǎn)生正壓,讓鞘液通過0.2-μm的濾網(wǎng),進入一個儀器內部的水庫,即穩(wěn)壓室。穩(wěn)壓室通過全新的動態(tài)反饋壓力控制系統(tǒng)來控制壓力,保持恒定的液流量和泵脈動阻尼。因此,鞘液流動速度不會隨著鞘液桶中液體量而發(fā)生變化,而水庫也會自動去除鞘液供應過程中產(chǎn)生的小氣泡。
3.液流聚焦
在進行免疫分型這一類數(shù)據(jù)分辨率要求不高但要求快速的檢測時,可以采用高流速。而低流速則用于對高分辨率和靈敏度有著嚴格要求的應用。
4.軟件系統(tǒng)
液流系統(tǒng)通過和BD FACSCanto臨床軟件或FACSDiva™軟件整合,可以實現(xiàn)日常操作程序的自動化,如開機,關機,日常清洗等。BD FACS™關機液可以防止液流管道內鹽的結晶,同時還可以防止細菌生長。在儀器關機程序中,BD FACS關機液會替換鞘液,填充所有上樣管道和鞘液管路。
5.LED 指示燈
LED位于前面板上方,用以顯示各個檢測參數(shù)的獲取狀態(tài)。當信號水平達到預設閾值時,相應的LED就會閃爍。
6.創(chuàng)新的光學設計,提供高靈敏度
光路的激發(fā)和收集裝置都采用了創(chuàng)新的設計,減少激發(fā)損失,從樣品中獲取更多信息。BD FACSCanto™ II系統(tǒng)的光路是由多達3根的激光組成:藍激光(488-nm, 空氣冷卻,固態(tài)20-mW),紅激光(633-nm,17-mW HeNe)和紫激光(405-nm, 固態(tài)30-mW)。激光照射激發(fā)樣品中的細胞,并通過濾光片收集散射光和熒光信號到檢測器。
7.激發(fā)
激發(fā)光路由多個固定波長的激光組成,光導纖維將光信號傳到到光束整形棱鏡和消色差聚焦透鏡,在流動池中產(chǎn)生空間分離的光斑。每個棱鏡都將激光束聚焦進入廣角耦合使用流動池。由于光路以及樣品流束都是固定的,因此每天以及每次實驗的光路都是固定的,使用者無需干預此過程/步驟。
8.發(fā)射
發(fā)射信號經(jīng)過流動池傳輸?shù)綑z測器陣列中:一個八角形檢測器檢測藍激光信號,兩個三角形檢測器分別檢測紅激光和紫激光信號。八角檢測器含有五個PMT,可以檢測488nm的藍激光,其中一個PMT收集側向散射光的信號。每個三角檢測器里有兩個PMT,分別檢測633nm(紅)和405nm(紫)激光激發(fā)的信號
9.光路收集
八角和三角檢測器是BD的探測器陣列,利用一系列光的反射將光信號引導到目標探測器中,得到高效的光信號收集和的光信號保留。BD這種序列反射的設計提高了儀器的靈敏度,首先收集最暗的發(fā)射光信號,從最長的波長(通常為PE-Cy™7)開始收集,依次到最短的波長(FITC)。
10.可選配件以及相關工具,滿足實驗室需求
使用可選配的BD FACS™上樣器或BD™高通量進樣器(HTS),可以提高上樣的效率。
BD FACS Loader是可選的配置,可實現(xiàn)無人看管的上樣,進一步提高效率。BD FACS Loader傳送帶最多可容納40個12 x 75-mm的樣品管,并自動裝載到BD FACSCanto™ II系統(tǒng)上,無需操作人員干預。
11.BD FACS上樣器
上樣器設備直接安裝在流式細胞儀上,包括一個驅動系統(tǒng),樣品管升降裝置,以及滑動抽屜上的傳感器。兩個推拉門可以安全的封閉抽屜,保護技術人員在操作中不會碰到移動的部件。
BD FACS上樣器利用壓縮空氣,提供更可靠的樣品管上樣,還具有智能樣品管引導裝置,當樣品管沒有正確放置或裝載的時候,會自動報警。
每個傳送帶上都標有特定的ID和光讀標簽,用于識別。BD FACS上樣器通過BD FACSCanto臨床軟件和BD FACSDiva™軟件來操作。BD FACS上樣器與BD FACS™ Sample Prep Assistant (SPA)以及BD FACS™ Lyse Wash Assistant (LWA)都可兼容。
12.BD 高通量進樣器
可選配的BD高通量進樣器(HTS)提供自動化的快速樣品采集,可以在15分鐘之內完成微孔板上樣,樣品殘留量小于1%。在高通量模式下,快速高效的樣品采集源于同步使用兩個高精度的泵完成樣品混合,進樣并清洗探針。標準通量模式則可用于采集更大的樣本量。HTS支持標準96孔板和384孔板。它是由BD FACSDiva軟件控制,使用者可以自定義傳輸方案,混合,清洗以及分析參數(shù)。
13.樣品制備的支持
BD生物科學提供兩個BD FACSCanto II輔助儀器,幫助繁忙的實驗室提高速度,減少變異,簡化樣品制備流程。
The BD FACS™ Sample Preparation Assistant II (SPA II) 支持無人看管的裂解清洗/無需清洗的樣品處理。BD FACS™ Lyse Wash Assistant (LWA)可實現(xiàn)樣品的裂解,混合以及清洗,并在PBS中重新懸浮樣本。儀器還支持預設置的和客戶自定義的操作方案。
14.條碼閱讀器
可選配的BD FACSCanto II手持式條碼閱讀器可以讀取二維標簽條碼,它可以為BD FACSCanto臨床軟件讀取BD FACS™7色設置微球試劑的補償矩陣。
美國BD FACSCanto II流式細胞儀
參數(shù)名稱 | 參數(shù)值 |
---|---|
1)檢測性能? 熒光檢測靈敏度 | FITC < 100MESF、PE < 50MESF |
? 熒光分辨率 | PI染色CEN樣本,G0/G1期全峰寬PI-Area CV < 2.0%(488nm激光) |
? 熒光線性度 | PI染色CEN樣本,雙粘體/單細胞比率2±0.05 (488 nm激光) |
? 散射光靈敏度 | 可以有效區(qū)分固定血小板和噪音信號,辨別細菌和0.5micron微球 |
? 分析速度 | 10,000個細胞/秒 |
? 檢測細胞大小 | 0.5μm-50μm |
? 補償方式 | 自動化、手動或脫機補償 |
2)光路系統(tǒng)激發(fā)光路 | 激光固定校準,不需要調整光路 |
激光規(guī)格 | 488nm激光器、633nm激光器 |
檢測方式 | 石英杯流動池,與熒光物鏡通過光膠偶連 |
光路引導系統(tǒng) | 固定光路系統(tǒng),激光和熒光傳導采用全光纖化光路 |
熒光收集 | 八角形和三角形連續(xù)反射收集系統(tǒng) |
熒光濾片 | 488nm激光 |
633nm激光 | 660/20nm、712/21nm、780/60nm |
探測器配置 | 共8個探測器 |
3)信號處理? 信號捕捉模式 | 數(shù)字化信號 |
? 電子死時間 | 0 |
? 數(shù)據(jù)分辨率 | 262,144channel |
? 分析參數(shù) | 共8個,包括2個散射光信號和8個熒光信號 |
? 熒光補償 | 任意熒光間補償(硬件補償、軟件脫機補償) |
? 信號脈沖處理 | 任意參數(shù)的脈沖信號高度、面積、寬度檢測以及比率檢測 |
? 時間參數(shù) | 可與任意參數(shù)結合,做動態(tài)檢測 |
? 閾值 | 可以任意激光任意參數(shù)取閾值 |
4)液流系統(tǒng)? 流速控制 | 10μl/min-120μl/min |
? 樣本死體積 | 30μl(使用標準12 ´ 75mm試管) |
? 石英杯規(guī)格 | 430mm ´ 180mm |
? 液流車系統(tǒng) | 有鞘液桶和廢液桶以及兩個清洗液桶 |
? 樣本交叉污染率 | ≤ 0.1% |
5)數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)? 工作站 | HP Z210工作站 |
? 數(shù)據(jù)存儲 | 硬盤500GB以上 |
? 內存 | 2GB |
? 顯示器 | 兩個19英寸液晶顯示器 |
? 打印機 | HP彩色激光打印機 |
? 數(shù)據(jù)文件格式 | 流式細胞儀標準FCS 3.0 |
? 軟件包 | 流式多功能獲取分析軟件 |
? 臨床檢測軟件 | FACSCanto Clinical |
? DNA分析軟件 | ModFit |