OscpSRP43參與水稻葉綠體正常發(fā)育以及光合作用,OscpSRP43組成性表達(dá),包括根、莖、葉、葉鞘以及穗,在葉片表達(dá)量最高。
針對(duì)OscpSRP43蛋白PhytoAB研發(fā)了PHY4352S。PHY4352S的免疫原為Os03g0131900的一段多肽序列,確定反應(yīng)物種: Oryza sativa。WB結(jié)果如下圖:
首先研究了cpSRP43突變株(chaos)中的TBS蛋白的含量,發(fā)現(xiàn)葉綠素合成限速酶-谷氨酰-tRNA 還原酶 (GluTR),鎂離子螯合酶 (MgCh) 的催化亞基CHLH以及MgCh的激活子GUN4的含量顯著下降,表明cpSRP43能夠保護(hù)GluTR, CHLH 和GUN4的穩(wěn)定性。生物熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(BiFC)和體外Pull down實(shí)驗(yàn)證實(shí)了它們之間的相互作用。為了弄清楚cpSRP43是如何保護(hù)TBS蛋白的穩(wěn)定性,研究人員進(jìn)行了體外的蛋白散射分析(Scattering assay),發(fā)現(xiàn)cpSRP43能保護(hù)TBS蛋白避免在高溫下形成聚集失活。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),研究人員將野生型和chaos在高溫(42 °C)下處理后檢測cpSRP43對(duì)于TBS的熱保護(hù)作用,發(fā)現(xiàn)缺失了cpSRP43的突變體中TBS蛋白穩(wěn)定性下降,葉綠素的合成相比野生型下降明顯,進(jìn)一步證實(shí)了cpSRP43對(duì)于TBS蛋白的熱保護(hù)作用。
葉綠體信號(hào)識(shí)別粒子 (cpSRP)由亞基 cpSRP43 和 cpSRP54 組成,之前已經(jīng)知道cpSRP43和cpSRP54形成異源二聚體介導(dǎo)捕光天線蛋白(LHCP)在葉綠體內(nèi)的運(yùn)輸和膜整合并且cpSRP54能夠促進(jìn)cpSRP43去保護(hù)LHCP免于聚集失活【4】。在本研究中,研究人員在蛋白散射分析中添加cpSRP54,驚奇地發(fā)現(xiàn)cpSRP43對(duì)于TBS蛋白的熱保護(hù)作用被大大削弱,表明與對(duì)LHCP的情形相反, cpSRP54抑制cpSRP43對(duì)TBS蛋白的保護(hù)作用。為了弄清楚cpSRP54是如何在促進(jìn)/抑制的兩種角色中轉(zhuǎn)換的,研究人員研究了溫度對(duì)于cpSRP43-cpSRP54互作的影響,發(fā)現(xiàn)高溫削弱了 cpSRP54 與 cpSRP43 的相互作用,從而釋放cpSRP43與TBS蛋白互作并保護(hù)TBS蛋白。
上樣蛋白分別為5 μL水稻葉綠體蛋白(Os-Chl);
一抗稀釋比例: 1: 5000.