磷酸基團近紅外熒光染料 SunRed是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于磷酸的試劑盒，磷酸酶催化的太陽*磷酸鹽（SRP）的水解產(chǎn)生可以用633nm激光激發(fā)并且發(fā)射~660nm的太陽紅熒光團。雖然Sun Red很容易在633 nm處激發(fā)，紅色發(fā)射約為660 nm，但SRP在633 nm處的吸收非常小，沒有紅色發(fā)射，使SRP成為敏感的NIR磷酸酶傳感器之一。請不要使用DMSO制備儲備溶液，因為它會顯著增加分析背景。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的磷酸基團近紅外熒光染料 SunRed
實驗方案
樣品實驗方案
簡要概述
1.在Tris緩沖液（50μL）中制備并添加10 - 50μMSunRed 磷酸鹽
2.添加堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50μL）
3.在室溫或37°C孵育30至120分鐘
4.監(jiān)測Ex / Em = 620/660 nm處的熒光強度（截止640 nm）
溶液制備
1.儲備溶液
所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 SunRed 磷酸鹽原液：
在無菌水中制備2至10 mM的SunRed 磷酸鹽儲備液。 注意：應(yīng)立即使用原液。 注意：不要使用DMSO，ETOH或METH制備儲備溶液，因為它會顯著增加分析背景。 注意：避光。
2.工作溶液
SunRed 磷酸鹽工作溶液（2X）：
在實驗當(dāng)天，將SunRed 磷酸鹽固體溶解在無菌H2O中，或在室溫下解凍等份的SunRed 磷酸鹽儲備溶液。 在100 mM Tris緩沖液或pH 8至9的緩沖液中制備10至50μM的2X工作溶液。建議使用SunRed 磷酸鹽終濃度5至25μM測定溶液中的堿性磷酸酶活性。
樣品分析
1.在堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μL2XSunRed™磷酸鹽工作溶液，使總堿性磷酸酶測定體積為100μL/孔。 對于384孔板，在每個孔中加入25μL樣品和25μL2XSunRed™磷酸鹽工作溶液。
2.在所需溫度下孵育反應(yīng)30至120分鐘，避光。
3.用熒光板讀數(shù)器監(jiān)測Ex / Em = 620 / 630nm處的熒光增加（在640nm處截止）。
