一、方法原理簡介
標準依據(jù)：國家《中華人民共和國生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB 5749-2006）中增加了賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的微生物指標，要求為<1個/10L。該產(chǎn)品運用的檢測方法是國標規(guī)定的“兩蟲”IFA 檢測方法，采樣淘洗及 IMS 系統(tǒng)均符合國標及美國 EPA1623 的標準方法。
具體步驟如下：過濾采樣→淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→顯微鏡檢
二、主要特點及技術(shù)*性說明
（一）、兩蟲系統(tǒng)設計的標準性、合理性、適用性
1、 美國UniBest公司Compact 型兩蟲檢測儀 IFA 染色系統(tǒng)符合并優(yōu)于中國國標。
2、 美國UniBest公司Compact 型兩蟲檢測儀 IMS 免疫磁分離系統(tǒng)采用國標 GB/T 5750.12-2006 方法。
3、 美國UniBest公司Compact 型兩蟲檢測儀過濾系統(tǒng)采用符合國際技術(shù)規(guī)范規(guī)定的一次性濾囊。
（二）、兩蟲系統(tǒng)的可靠性、穩(wěn)定性
1、 過濾步驟回收率 ≥99%
2、 淘洗步驟回收率 ≥80%
3、 IMS 免疫磁分離步驟回收率 ≥90%
4、 總回收率（過濾、淘洗、磁珠分離、染色）≥ 35%
5、 檢測結(jié)果相對標準差 ≤10%
6、 鏡檢率：賈第鞭毛蟲孢囊 99%檢出，隱孢子蟲卵囊 99%檢出
7、 檢測可處理高濁度水樣：可達 100（NTU）
8、 試劑盒配備預制的陽性對照玻片，確保試劑盒的有效活性；*避免誤檢，確保檢測的準確性。
9、 保質(zhì)期長：美國 UniBest 優(yōu)佰達公司 ClearScan 系列兩蟲 IFA 染色試劑保質(zhì)期長達 24 個月，是業(yè)內(nèi)保質(zhì)期更長、性能更穩(wěn)定的 IFA 試劑。
（三）、兩蟲系統(tǒng)的*性、準確性、經(jīng)濟性
1、 標記單克隆抗體：包括抗隱孢子蟲抗體和抗賈第鞭毛蟲單克隆抗體的異硫氰酸熒光素（FITC），系一種的免疫球蛋白M五聚體，由5 個FITC結(jié)合點位同時標記一個抗體，具有顯著的明亮熒光效果，該抗體是國標推薦的染色試劑。
2、 提供固色液：固色液使顯色更穩(wěn)定，幾天后仍不褪色鏡檢效果依然清晰。
3、 美國 UniBest 優(yōu)佰達公司 ClearScan 系列 IFA 染色試劑已添加專用復染液，可使聚焦更準確，計數(shù)更清晰準確。
4、 提供陽性對照玻片：試劑盒（25 次測試量）中含一個預制的載玻片供時時自檢，使測試更便捷更省時。
5、 采樣過濾系統(tǒng)采用美國 EPA1623 標準推薦的一次性濾囊，*杜絕樣品交叉污染；可以在不更改所有實驗儀器、試劑及器具的情況下*替代其它品牌的一次性或多次使用的過濾器具。
6、 美國 UniBest 公司 ClearScan 系列兩蟲檢測系統(tǒng)，日常檢測運行成本與市場同類產(chǎn)品相比具有明顯優(yōu)勢。
三、系統(tǒng)概述
（一）、采樣淘洗濃縮系統(tǒng)
采用符合中國國標及美國 EPA 要求的囊式過濾器對水樣進行過濾，將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過濾器上，該過濾器可用于實驗室及野外現(xiàn)場水樣過濾。濾囊利用兩蟲專用淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的兩蟲振蕩洗脫下來，最后進行離心收集。
（二）、免疫磁分離系統(tǒng)（IMS）
IMS 過程使用美國 UniBest 優(yōu)佰達公司的 ClearScan 系列兩蟲專用免疫磁分離試劑盒，利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲特異性抗原相結(jié)合，在磁場中高效選擇性分離，該步驟可保證檢測的特異性。
（三）、IFA（間接免疫熒光）染色系統(tǒng)
使用美國 UniBest 優(yōu)佰達公司的 Cellabs 型檢測賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲診斷專用試劑盒（內(nèi)含的免疫球蛋白 M 五聚體 FITC 單克隆抗體）對水樣中的兩蟲（抗原）進行熒光標記，同時利用細胞核染色劑 DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）與細胞核中的雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出熒光，排除假陽性反應，從而提高鏡檢準確性。
（四）、顯微鏡檢系統(tǒng)
使用兩蟲專用熒光顯微鏡對著色樣本進行檢測，觀察樣本，對符合孢囊和卵囊大小、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國標 GB/T 5750.12-2006 中賈第鞭毛蟲孢囊與隱孢子蟲卵囊的特征（見尾頁）進行定性、定量分析。
四、技術(shù)參數(shù)
系統(tǒng) | 設備 | 主要性能技術(shù)標 | 設備的應用和特點 |
過濾采樣及淘洗濃縮系統(tǒng) | UniBest 公司囊式過濾器 | 1、 此方法比其他方法更快更簡單，可以對多樣個樣品同時進行處理； 2、 一次性的設計杜絕交叉污染，避免造成假陽性誤判 3、 囊式濾器采用特制的0.45μm孔徑的改良濾膜能99%截留兩蟲，排除了假陰性。 | 該方法符合中國國標 GB5750.12-2006 及美國 EPA 兩蟲過濾采樣方法；專用于水源水與自來水的隱孢子蟲及賈第鞭毛蟲的濃縮與回收；使用簡單，濾器無需安裝和清洗。 |
UniBest 公司洗脫振蕩器 | 1、 電源：230V 50HZ 50W 2、 工作振幅：1.5mm 3、 速度范圍：0-1000 振幅/分鐘 4、 上限載重：3kg 5、 凈重：8kg | 該產(chǎn)品可同時洗脫 12 個樣品，有效地節(jié)省了大量的人力及樣品前處理時間。 | |
專用蠕動泵 | 1、 適用電源：AC220V/50Hz 2、 消耗功率：<140W 3、 流量范圍：0.7-6000ml/min 4、 轉(zhuǎn)速 10-600rpm 5、 液晶顯示屏 6、 工作環(huán)境：環(huán)境溫度 0~40°C，相對濕度<80% | 專用蠕動泵因水樣只接觸泵管，維護清洗簡單?？蛇x雙通道，同時采樣兩個樣品。 | |
專用離心機 | 1、 適配器：4x250ml 2、 上限轉(zhuǎn)速：5300rpm 3、 定時范圍：0-99min 4、 電源：AC220V 50Hz 20A 5、 相對大離心力：5000g（注：g 為重力加速度） 6、 噪聲（上限轉(zhuǎn)速）： ≤ 60Db(A) 7、 凈重：30kg | *的安全保護設計： 1、 超速停止、門蓋自鎖、誤操作保護 2、 緊急情況開門 3、 防爆門蓋 4、 蜂鳴器報警系統(tǒng) 5、 具有 10個程序升降速率曲線 |
五、備注
按照國標 GB 5750 12-2023《生活飲用水標準檢驗方法》規(guī)定，“兩蟲”檢測系統(tǒng)大致分為以下五個步驟，分別是：過濾采樣→ 淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→ 顯微鏡檢，其中過濾采樣僅僅是“兩蟲”檢測環(huán)節(jié)中的一個非核心步驟，實驗方法中所提到的過濾器的型號并不能斷章取義地代表兩蟲檢測的采樣方法實質(zhì)，更不能以偏概全地代表兩蟲檢測全過程的檢測方法；過濾采樣器只是收集樣品的工具，而并非兩蟲檢測的關鍵技術(shù)，并且隨著兩蟲采樣技術(shù)的進步，只要使用的兩蟲采樣器達到樣本采集的目的即可；如果僅僅用一個過濾采樣器的型號來自稱是國標甚至國際標準的實驗方法，就會混淆了兩蟲檢測方法以及國家標準的本來實質(zhì)。
美國 UniBest 優(yōu)佰達集團的“兩蟲”檢測系統(tǒng)，采用的是一次性濾囊的過濾采樣方法，且性能指標不僅滿足而且優(yōu)于國標（國標要求濾囊的孔徑為 1μm，我們的孔徑為0.45μm，更小的孔徑，更, 能, , , 保證兩蟲的 99%*截留, ）。
“兩蟲”檢測的核心步驟在于 IFA（間接免疫熒光）染色，美國 UniBest 優(yōu)佰達集團“兩蟲”染色試劑是國標核心步驟的染色試劑。
