本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6355 |
商品介紹：
測定意義: ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。 測定原理： 利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。 所需的儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
氯化鈉素B肉湯基礎(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g
100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride 4℃密封干燥保存
1%TTC溶液 1ml/支*5
1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存
2 ug pBlueScript SK（-） pBlueScript SK（-） 低溫運輸，-20℃保存
100g DNCTAB(十六烷基基)
2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運輸，-20℃保存
1%聚酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g
1瓶 CCC-HEK-1細胞株 CCC-HEK-1 低溫運輸和保存
腸球菌顯色培養(yǎng)基 1000ml
1mL EDTA溶液，0.2M EDTA Solution -20℃保存
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒微量法ADCY9 苷酸環(huán)化9抗體 0.2mlCAMK1D 鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體 規(guī)格: 0.2ml
CTGF 結締組織生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP 辣根過氧化物標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
PLAGL1/ZAC1 多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf42 17號染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2ml
UXT/Ubiquitously expressed transcript 廣泛表達轉錄蛋白UXT抗體 規(guī)格: 0.2mlBEND5 BEN結構域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
FGF20 成纖維細胞生因子20抗體 規(guī)格: 0.2mlChloroplast protease 葉綠體蛋白抗體（植物） 規(guī)格: 1ml
CCDC11 卷曲螺旋結構域蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2mlLAMR1 層粘連蛋白受體1抗體（N端） 規(guī)格: 0.1ml
GPR39 G蛋白偶聯(lián)受體39抗體 規(guī)格: 0.1mlGFRA4 GDNF家族受體α-4抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-APBB1 (Ser347) 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-IGF1R(Tyr1280) 磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
BFAR/RNF47 環(huán)指蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Ack1(Tyr284) 磷酸化Ack1抗體 0.1ml
MLF1/2/3 髓細胞性白蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Rab24(Ser95) 磷酸化ras基因相關蛋白Rab24抗體 規(guī)格: 0.1ml
TBX1/Brachyury 先心相關蛋白TBX1抗體 規(guī)格: 0.2ml
