特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6350
產(chǎn)品分類：輔酶Ⅱ系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。 測(cè)定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。 所需的儀器和用品 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pCAMBIA2330 pCAMBIA2330 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
纖維二糖-（CC）瓊脂 Cellobiose-polymyxin E Agar 250g
10g Indole 室溫保存
50T 鏈球菌B族PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
5mL 黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子-不含TPA Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
250mL Beta-ME-EDTA Solution（beta-EDTA溶液） Beta-ME-EDTA Solution 常溫保存
1.5mL miRNA尿素-PAGE上樣液,6× miRNAoN -20℃保存
2 ug pGCsi/H1/Neo SHGFP pGCsi/H1/Neo SHGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
抗生素檢定培養(yǎng)基8號(hào) Antibiotic Agar NO.8 250g
1瓶 Cyc-Tag(S49)細(xì)胞株 Cyc-Tag(S49) 低溫運(yùn)輸和保存
CIN-1瓊脂平板（9cm） CIN-1 Agar 10個(gè)/包
輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法CDKL3/NKIAMRE 細(xì)胞周期蛋白依賴性激樣3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG 兔抗豬IgG 規(guī)格: 1mg
Bestrophin 4 卵黃狀黃斑蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
BRCC4/BRCC45 易基因復(fù)合蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat anti-Rabbit IgG whole serum 羊抗兔IgG抗清 規(guī)格: 1ml
phospho-ITGB4(Tyr1494) 磷酸化整合素β4抗體 規(guī)格: 0.1ml
LARG Rho的核苷酸交換因子12抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Ser214) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
LDHC/Cancer,testis antigen 32 酸脫LDH-C（瘤/睪抗原32）抗體 規(guī)格: 0.1ml
MAGEA11 黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
