本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
超氧陰離子測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6431 |
商品介紹：
測定意義: 生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。 測定原理： 超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)A530值可以計算樣品中O2－含量。 自備實驗用品及儀器： 天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
50次 雙染細胞凋亡檢測試劑盒 Double-Stain Apoptosis Detection Kit 4℃避光保存
250mL IEF Cathode Buffer,10X IEF Cathode Buffer,10X 常溫保存
100次 即用型熒光定量PCR試劑盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存
2 ug pLV-cGFPII pLV-cGFPII 低溫運輸，-20℃保存
脆弱擬桿菌活化培養(yǎng)基肉湯 Bacteroides Phage Recovery Medium Broth 250g
1瓶 NCI-H295R細胞株 NCI-H295R 低溫運輸和保存
m-遠藤氏培養(yǎng)基 M-Endo Medium 250g
1mg 親和素 Avidin, Chicken Egg White -20℃保存
500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8 Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8 常溫保存
1mg 重組蛋白G Recombinant Protein G -20℃保存
2 ug pBAD/gIII C pBAD/gIII C 低溫運輸，-20℃保存
超氧陰離子測試盒微量法GLO1 乙二醛1抗體 規(guī)格: 0.1mlTIMP-1(CT) 金屬蛋白組織抑制因子-1抗體（C端） 0.1ml
ChRM3/Acetylcholine receptor(M3) 毒蕈堿型乙酰受體M3抗體 規(guī)格: 0.1mlCCL15/MIP5 巨噬細胞性蛋白15 規(guī)格: 0.1ml
PNAT/NAT2 N-乙?；D(zhuǎn)移2抗體 規(guī)格: 0.1mlDHRSX 短鏈脫/還原家族X抗體 規(guī)格: 0.2ml
HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高遷移率族蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.2mlKLLN Killin-p53調(diào)節(jié)復制抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
PTGER1 前列素EP1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlNoggin 指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體 0.2ml
phospho-PI3K p85/PIK3R1(Tyr368) 磷酸化磷脂酰肌醇激抗體 規(guī)格: 0.1mlIGSF16/CD300C 免疫球蛋白超家族成員16抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRKD1/PKC mu 蛋白激C mu型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 磷酸化p21激活激1/2/3抗體 規(guī)格: 0.1ml
NS5ATP9/KIAA0101 丙型毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2mlIFNAR2/IFNABR 干擾素α受體2抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD4 CD4抗體 0.1mlFOXO1 叉蛋白O1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
HSPB7/cvHSP 熱休克蛋白β7抗體 規(guī)格: 0.2ml
SLC16A7/MCT2 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
