實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:蛋白質(zhì)羰基測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6428
產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測定意義: 蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。 測定原理: 羰基與2,苯肼反應(yīng)生成紅色2苯腙,在370nm處有特征吸收峰。 需自備的儀器和用品: 天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿和蒸餾水,無水乙醇,乙酸乙酯。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
50T 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100次 超氧化物試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
500mL Lysis Buffer Lysis Buffer 常溫保存
20次 天凈沙Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒 Ribo-SPIA RNA Amplification Kit -20℃保存
50T 牛肺炎支原體PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
無氮培養(yǎng)基 Nitrogen-free Culture-medium 250g
1瓶 P3X63Ag8細(xì)胞株 P3X63Ag8 低溫運(yùn)輸和保存
改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬(mLST-Vm) Modified lauryl sulfate tryptose vancomycin medium 250g
25mg 6- 羧基二乙酸熒光素 6-Carboxyflucrescein Diacetate -20℃保存
50T 傳染性胃腸炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2000ATU 水蛭素溶液,2mg/mL Hirudin Solution -20℃保存
蛋白質(zhì)羰基測試盒紫外分光光度法SCGB3A1 結(jié)合珠蛋白家族3A1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-FLT3 (Tyr969) 磷酸化FMS樣酪激3 規(guī)格: 0.1ml
CD54/ICAM-1 細(xì)胞間粘附分子-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
eIF2 alpha 真核啟動因子2α抗體(eIFα2) 規(guī)格: 0.2ml
Ninjurin 2 神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Tau protein(Ser262) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
hnRNP R 異質(zhì)性核糖核蛋白R 規(guī)格: 0.2ml
HSD17B1 羥類固醇脫17β-HSD抗體 規(guī)格: 0.1ml
DCP 異常凝原/脫-γ-羧基凝原抗體 規(guī)格: 0.2ml
presenilin 1/PS-1 早老素蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FAM101A FAM101A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Torc2/Crtc2(Ser171) 磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 規(guī)格: 0.1ml