特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：丙二醛（MDA）測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6414
產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測(cè)MDA的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。 測(cè)定原理： MDA與硫代酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在532nm有最大吸收峰，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測(cè)定600nm下的吸光度，利用532nm與600nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
乙酰胺肉湯生化管 20支
1瓶 A-673細(xì)胞株 A-673 低溫運(yùn)輸和保存
營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）顆粒 Nutrient Broth 250g
150次 天凈沙甲基化PCR 2.0試劑盒 Methylation-Specific PCR V2.0 Kit 常溫保存，蛋白K、即用型PCR Mix3.0需要-20℃保存。
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH8.5 MOPS Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
100uL 菠菜RT-PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存
2 ug pNZ8048 pNZ8048 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
M1培養(yǎng)基 M1 Medium 250g
1瓶 SGC-7901細(xì)胞株 SGC-7901 低溫運(yùn)輸和保存
氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（2015藥典） 250g
10g 葡聚糖 T-500 Dextran T-500 室溫保存
丙二醛（MDA）測(cè)試盒可見分光光度法RAP2B 原基因相關(guān)蛋白R(shí)AP2B抗體 規(guī)格: 0.2ml
ODF2/Cenexin1 子尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
MFGE8/BA46 上皮細(xì)胞抗原BA46抗體 規(guī)格: 0.2ml
GABA 兔抗γ1氨基丁酸抗體 規(guī)格: 0.2ml
ACEI 管緊張素1轉(zhuǎn)換抑制劑抗體 0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/FITC FITC標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.3ml
EIF4B 真核翻譯起始因子4B抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
PILR beta 細(xì)胞表面受體PILRβ抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-8/CXCL8 白介素8抗體 規(guī)格: 0.1ml
EGF(mouse) 表皮生因子抗體（小鼠） 規(guī)格: 0.1ml
Survivin 細(xì)胞凋亡抑制因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
