實驗方法學：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉動，每隔5～10分鐘轉動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒：本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱：線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法
產品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：熒光法
產品貨號：BK-01S6410
產品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：
測定意義: 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。 正常情況下，細胞內抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細胞內活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現(xiàn)氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。 因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。 測定原理： 熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。 需自備的儀器和用品： 多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
100mL PEG-TE-LiAc Solution PEG-TE-LiAc Solution 常溫保存
0.1mL×10 SURE化學感受態(tài)細胞 SURE Competent Cell -80℃保存
2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低溫運輸，-20℃保存
B5培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖） B5 Medium(without agar or sucrose) 250g
2 ug pC-YFP pC-YFP 低溫運輸，-20℃保存
100U PreScissiom 蛋白 PreScissiom Protease -20℃保存
2 ug p53Blue p53Blue 低溫運輸，-20℃保存
萘啶酮酸(4.0mg) Nalidixic Acid 4.0mg*5
1g Xanthine 室溫干燥保存
1000支 0.5 mL RNase-free 離心管 常溫
50 T 過氧化氫測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法Hemopexin/HPX 糖蛋白β-1B抗體 規(guī)格: 0.1mlRNF35 環(huán)指蛋白35抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-chicken IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlCatalase 過氧化抗體 規(guī)格: 0.2ml
ADAMTS2 整合素樣金屬蛋白與凝2型抗體 0.2mlfactor XIII 凝因子13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子) 規(guī)格: 0.2ml
Transferrin(1F10) 轉鐵蛋白單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
SERPINB12 絲蛋白抑制劑B12抗體 規(guī)格: 0.2ml
Granzyme D/B/E/N/G/F/H 顆粒D/B/E/N/G/F/H抗體 規(guī)格: 0.1ml
Emerin Emerin蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
WIG-1/PAG608 野生型P53誘導基因1抗體 0.1ml
APLP2 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus) 多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml
TSP50 瘤/睪抗原20抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Histone H2A.X (Tyr143) 磷酸化組蛋白H2AX抗體 規(guī)格: 0.1ml
